転写開始期の動的シグナル認識

转录起始过程中的动态信号识别

• 批准号: 07268222
• 负责人: 嶋本 伸雄
• 金额: $ 1.66万
• 依托单位: National Institute of Genetics
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
• 财政年份: 1995
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1995 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-07268222/
• 关键词: RNAポリメラーゼ; プロモータークリアランス; モリバンド複合体; 微小カラム転写法; 大腸菌; 転写機構

転写において、RNAポリメラーゼがDNA上のプロモーターに結合した後には、プロモータークリアランスと呼ばれるRNA伸長の障害期があると仮定され、原核、真核を問わず、短鎖RNAの合成・解離、一時停止が起こるが、その内容は未知であった。RNA切断因子のような新しいクラスの転写調節因子は、この時期に働くと考えられており、全生物でプロモータークリアランスの内容の解明が、転写調節の機構の研究の最も新しいハイライトとなっている。申請者らは、樹脂に固定化したDNA上で転写をおこなって、転写複合体に保持されたRNAと解離したRNAとを低速遠心で分離するという速度論的方法(固定化オペロン法)により、新種の転写複合体と、従来の直列モデルと異なる新しい反応機構を見出した。つまり、プロモータークリアランスは、分岐した経路をもつ過程で、第二の経路は、新たに発見されたMoribund Complexをへて、既知のDead end Complexに至る道である(J.Mol.Biol.に発表)。速度論的に提案された新しいモデルの生化学的な証明のために、市販の液体クロマトグラフィー装置を活用した、速度論的方法を開発し、Moribund Complexが転写開始後早くとも30秒以内には、形成されていることを見出した(Nuc.Acids Res.に発表)。また、蛋白フットプリンティングに適した大腸菌RNAポリメラーゼを設計、構築した。IEEE Trans IAの論文について、米国応用電気電子学会より、年間論文最優秀賞を授与された。

Planning to write に お い て, RNA ポ リ メ ラ ー ゼ が DNA の プ ロ モ ー タ ー に combining し た after に は, プ ロ モ ー タ ー ク リ ア ラ ン ス と shout ば れ る RNA elongation stage の handicap of が あ る と 仮 set さ れ, prokaryotic and eukaryotic を asked わ ず, short の lock RNA synthesis, dissociation, temporarily stopped が こ る が, そ の content は unknown で あ っ た. RNA cut factor の よ う な new し い ク ラ ス の planning write regulating factor は, こ の period に 働 く と exam え ら れ て お り, all biological で プ ロ モ ー タ ー ク リ ア ラ ン ス の content の interpret が, planning to write の の most も の research new し い ハ イ ラ イ ト と な っ て い る. Applicants ら に は, resin immobilized し た DNA で planning write を お こ な っ て, planning to write complex に keep さ れ た RNA と dissociation し た RNA と を low-speed telecentric separation で す る と い う speed theory methods (immobilized オ ペ ロ ン method) に よ り, new species の planning to write complex と, 従 の inline モ デ ル と different な る new し い を 応 authorities see the し た. つ ま り, プ ロ モ ー タ ー ク リ ア ラ ン ス は, branching し た 経 road を も で つ process, the second の は 経 road, new た に 発 see さ れ た Moribund Complex を へ て, both known の Dead end Complex に to る way で あ る (J.M ol. Biol. に 発 table). Speed theory proposed に さ れ た new し い モ デ ル の biochemistry な prove の た め に, city vendor の liquid ク ロ マ ト グ ラ フ ィ ー device を use し た, speed theory method を 発 し, Moribund Complex が planning to write after the start of early く と も within 30 seconds に は, forming さ れ て い る こ と を shows し た (Nuc) Acids (Res.に) Youdaoplaceholder0, protein フットプリ ティ ティ フットプリ グに グに suitable for <s:1> た coliform bacteria RNAポリメラ ゼを ゼを design and construction of た. IEEE Trans IA <s:1> paper に に に て て て, American 応 electrical and electronic society よ て, annual Best Paper Award を awarded された.

项目成果

Washizu,M.: "Applications of Electrostatic Streach-and Positioning of DNA." IEEE Trans.IA. 31. 447-456 (1995)

Washizu,M.：“静电拉伸和 DNA 定位的应用”。

嶋本伸雄: "分子生物学から見た生物の複雑性さと多様性." J.Plasm.&Fus.Res.71. 842-846 (1995)

Nobuo Shimamoto：“从分子生物学的角度看生物的复杂性和多样性。”J.Plasm.&Fus.Res.71 (1995)。

Kubori: "A branched pathway in the early stage of transcription by Escherichia coli RNA polymerase." J.Mol.Biol.256. 449-457 (1996)

Kubori：“大肠杆菌 RNA 聚合酶转录早期的分支途径。”

Kubori,T.: "Kinetics of transcription in a minute column." Nuc.Acids.Res.24. in press (1996)

Kubori,T.：“微小柱中的转录动力学。”

Aramaki,H.: "Purification and characterization of a cam repressor(CamR)for the cytochrome P450cam hydroxylase operon on the Pseudomonas putida CAM plasmid." J.Bacteriol.177. 3120-3127 (1995)

Aramaki, H.：“恶臭假单胞菌 CAM 质粒上细胞色素 P450cam 羟化酶操纵子的 cam 阻遏物 (CamR) 的纯化和表征。”