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固定化オペロンを用いたRNAポリメラーゼのDNA上運動の解析

固定化オペロンを用いたRNAポリメラーゼのDNA上運動の解析
使用固定操纵子分析 RNA 聚合酶在 DNA 上的运动
批准号：
63580214
负责人：
嶋本 伸雄
金额：
$1.22万
依托单位：
Hiroshima University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for General Scientific Research (C)
财政年份：
1988
资助国家：
日本
项目状态：
已结题
起止时间：
1988 至 --
来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-63580214/
关键词：
固定化オペロンビデオチンアビジン転写開始RNAの伸長大腸菌RNAポリメラーゼσサブユニット

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项目成果

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本研究の目的は、大腸菌のシステムに、担体に固定化した鋳型DNA(固定化オペロン)を用いた新しい手法で、転写に伴うRNAポリメラーゼを中心とする転写複合体の、時間的な変化を検出することである。つまり、素早い混合によって転写を同調して開始させ、続いて、転写複合体に結合した蛋白分子と遊離の分子とを、急速ろ過または大過剰希釈によって分離して、複合体の構造を明らかにするというものである。本年度の成果は、1.λファージの強いプロモーターPRを持つ1.2kbのλDNAをpBR322にクローンし、EcoRI端をビオチン化してアビジンアクリルアミドに固定して、固定化オペロンを作製した。2.同期した転写を開始して、2秒から10秒後の1000倍に転写時と同じ緩衝液で大過剰希釈して、低速遠心で遊離の蛋白を除き、転写複合体中のσサブユニットを定量した。σ解離は、大過剰希釈により凍結され、約5秒でσサブユニットが解離する過程が追跡できた。3.希釈緩衝液中にATPやCTPが存在すると、2秒でもσは解離しており、σ解離は凍結されなかった。つまり、σの解離が凍結されたのは、ヌクレオシド三燐酸が除かれたためであった。ATPの非水解アナログを用いて、ATPのβγ燐酸ジエステル結合がσ解離に必要であることが示された。このことは、σの解離には、転写の開始とヌクレオシド三燐酸のβγ燐酸ジエステル結合の水解が必要であり、RNAの伸長だけでは不十分であることを明らかにした。
期刊论文(1)
专著(0)
科研奖励(0)
会议论文
Miki Fujioka,; Nobuo Shimamoto,; Akira Kawahara,; Minoru Amano,; Kazuo Watanabe.: Exp.Cell Res.180. (1989)
藤冈美纪；
DOI： --
发表时间：
期刊：
影响因子： --
作者： []
通讯作者：
翻訳分子機械の1分子観察系の構築
  • 批准号：
    17026035
  • 项目类别：
    Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
  • 资助金额：
    $3.58万
  • 财政年份：
    2005
  • 负责人：
    嶋本 伸雄
  • 依托单位：
    National Institute of Genetics
RNA蛋白複合体の情報発現分子機械としての動的機構
  • 批准号：
    15030240
  • 项目类别：
    Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
  • 资助金额：
    $2.05万
  • 财政年份：
    2003
  • 负责人：
    嶋本 伸雄
  • 依托单位：
    National Institute of Genetics
転写複合体に対するシャペロン作用としての転写調節
  • 批准号：
    15032255
  • 项目类别：
    Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
  • 资助金额：
    $2.24万
  • 财政年份：
    2003
  • 负责人：
    嶋本 伸雄
  • 依托单位：
    National Institute of Genetics
転写複合体に対するシャペロン作用としての転写調節
  • 批准号：
    14037267
  • 项目类别：
    Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
  • 资助金额：
    $2.24万
  • 财政年份：
    2002
  • 负责人：
    嶋本 伸雄
  • 依托单位：
    National Institute of Genetics