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担体固定化オペロンを利用した転写調節機構の動的解析

担体固定化オペロンを利用した転写調節機構の動的解析
利用载体固定化操纵子动态分析转录调控机制
批准号：
61580236
负责人：
嶋本 伸雄
金额：
$0.9万
依托单位：
Hiroshima University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for General Scientific Research (C)
财政年份：
1986
资助国家：
日本
项目状态：
已结题
起止时间：
1986 至 --
来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-61580236/
关键词：
転写調節固定化オペロンビオチン化DNAアビジンアガロース大腸菌RNAポリメラーゼ

项目摘要

项目成果

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転写調節機構を明らかにするためには、in vitroでの解析が重要である。この目的に使用する固定化オペロンを開発するのがこの研究の目的である。1.いろいろな長さのDNAのcohesive endをT4DNAポリメラーゼとビオチニルdUTPでblunt endにして、DNAを末端ラベルした。このDNAとアガロースビーズをアビジン-ビオチン特異的な結合をするかどうか試みた。数kbのDNAは結合されることが出来たが、いまのところ45kbのλDNAは結合させることが出来ていない。2.アビジンアガロースに直接結合させた方が、アビジンを介してビオチンアガロースに結合するよりも、効率が良かった。この効率は、アビジンの密度よりも、ビーズの粒子の細かさに依存していた。3.結合の特異性は、やや高い塩濃度で吸着させたほうが良く、50-70%特異的に結合するものが得られ、非特異的なものは高塩濃度で洗い落とすことが出来た。4.固定化オペロンにたいする酵素のacsessibilityは、固定化オペロンを制限酵素で消化して検討した。少なくともO 1kb固定化部位からはなれれば、立体障害はないことが分かった。5.大腸菌RNAポリメラーゼによる固定化オペロンの転写産物は遊離したDNA断片を転写したものと区別できず、固定化による影響はいまのところ見いだされていない。転写の停止も1000倍程度の急速な希釈によって簡便にできる可能性が強い。以上の結果は、DNAはアガロース粒子の表面に結合しており、固定化による副作用は、最小限に抑えられていることを示す。よって、目的はほぼ達成された。
期刊论文(3)
专著(0)
科研奖励(0)
会议论文
嶋本伸雄: 生物物理. 27. (1987)
岛本伸夫：生物物理学。27。（1987）
DOI： --
发表时间：
期刊：
影响因子： --
作者： []
通讯作者：
Nobuo Shimamoto: The Journal of Biological Chemistry. 261. 511859-1186 (1986)
Nobuo Shimamoto：生物化学杂志。
DOI： --
发表时间：
期刊：
影响因子： --
作者： []
通讯作者：
Nobuo Shimamoto: "Rapid kinetic study on sigma subunit release and NusA protein uptake during transcription by E.coli RNA polymerase in "RNA polymerase and the regulation of transcription"" Elsevier, (1986)
Nobuo Shimamoto：“大肠杆菌 RNA 聚合酶转录过程中 sigma 亚基释放和 NusA 蛋白摄取的快速动力学研究，《RNA 聚合酶和转录调控》”，Elsevier，（1986）
DOI： --
发表时间：
期刊：
影响因子： --
作者： []
通讯作者：
翻訳分子機械の1分子観察系の構築
  • 批准号：
    17026035
  • 项目类别：
    Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
  • 资助金额：
    $3.58万
  • 财政年份：
    2005
  • 负责人：
    嶋本 伸雄
  • 依托单位：
    National Institute of Genetics
RNA蛋白複合体の情報発現分子機械としての動的機構
  • 批准号：
    15030240
  • 项目类别：
    Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
  • 资助金额：
    $2.05万
  • 财政年份：
    2003
  • 负责人：
    嶋本 伸雄
  • 依托单位：
    National Institute of Genetics
転写複合体に対するシャペロン作用としての転写調節
  • 批准号：
    15032255
  • 项目类别：
    Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
  • 资助金额：
    $2.24万
  • 财政年份：
    2003
  • 负责人：
    嶋本 伸雄
  • 依托单位：
    National Institute of Genetics
転写複合体に対するシャペロン作用としての転写調節
  • 批准号：
    14037267
  • 项目类别：
    Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
  • 资助金额：
    $2.24万
  • 财政年份：
    2002
  • 负责人：
    嶋本 伸雄
  • 依托单位：
    National Institute of Genetics
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