DNA除去修復におけるXPA蛋白質の機能解析

酵母two-hybrid systemを用いたスクリーニングにより、XPA結合蛋白質として、RPAの34kDa(p34)サブユニットを同定し、すでに報告している。RPAはp70、p34、p11よりなるヘテロ三量体であるが、XPAはp34だけでなくp70とも結合した。また種々の組換え短縮XPAを作成し、p70との結合にはXPAの中央部分が、p34との結合にはN末端部分がそれぞれ必要であることを明らかにした。さらに、XPAの損傷DNAに対する結合能がRPAの共存により高まることを示した。XPAのRPA結合領域は、以前に決定したERCC1結合領域とは異なっていたので、XPA/RPA/ERCC1複合体の形成を調べたところ、その複合体の存在を確認した。次に、これらの蛋白質間の結合の動態をBIAにより解析した。センサーチップ上に固定化したXPAに対してRPAはすばやく結合しすばやく解離するが、ERCC1はゆっくり結合しゆっくり解離した。XPAのRPA、ERCC1に対する解離定数はそれぞれ1.9X10^<-8>M、2.5X10^7Mであった。また、RPAがXPAに結合した後でもERCC1はXPAに結合できるが、ERCC1がXPAに結合した後ではRPAはXPAに結合できなかった。この結果は、複合体の形成過程において、3つのコンポーネントの結合に順序があることを示唆している。酵母two-hybrid systemを用い、HeLa細胞由来cDNAライブラリーをスクリーニングすることにより、9種類のXPA結合蛋白質のcDNAを単離した。そのうち5つが新規の蛋白質をコードしており、2つ(GH17、HL12)については完全長のcDNAを単離した。GH17は374アミノ酸よりなる41kDaの蛋白質を、HL12は740アミノ酸よりなる87kDaの蛋白質をコードしていた。

酵母two-hybrid systemを用いたスクリーニングにより、XPA結合蛋白質として、RPAの34kDa(p34)サブユニットを同定し、すでに報告している。RPAはp70、p34、p11よりなるヘテロ三量体であるが、XPAはp34だけでなくp70とも結合した。また種々の組換え短縮XPAを作成し、p70との結合にはXPAの中央部分が、p34との結合にはN末端部分がそれぞれ必要であることを明らかにした。さらに、XPAの損傷DNAに対する結合能がRPAの共存により高まることを示した。XPAのRPA結合領域は、以前に決定したERCC1結合領域とは異なっていたので、XPA/RPA/ERCC1複合体の形成を調べたところ、その複合体の存在を確認した。次に、これらの蛋白質間の結合の動態をBIAにより解析した。センサーチップ上に固定化したXPAに対してRPAはすばやく結合しすばやく解離するが、ERCC1はゆっくり結合しゆっくり解離した。XPAのRPA、ERCC1に対する解離定数はそれぞれ1.9X10^<-8>M、2.5X10^7Mであった。また、RPAがXPAに結合した後でもERCC1はXPAに結合できるが、ERCC1がXPAに結合した後ではRPAはXPAに結合できなかった。この結果は、複合体の形成過程において、3つのコンポーネントの結合に順序があることを示唆している。酵母two-hybrid systemを用い、HeLa細胞由来cDNAライブラリーをスクリーニングすることにより、9種類のXPA結合蛋白質のcDNAを単離した。そのうち5つが新規の蛋白質をコードしており、2つ(GH17、HL12)については完全長のcDNAを単離した。GH17は374アミノ酸よりなる41kDaの蛋白質を、HL12は740アミノ酸よりなる87kDaの蛋白質をコードしていた。