DNA除去修復におけるXPA蛋白質の機能解析

XPA蛋白在DNA切除修复中的功能分析

• 批准号: 07272224
• 负责人: 西條 将文
• 金额: $ 3.2万
• 依托单位: Osaka University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
• 财政年份: 1995
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1995 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-07272224/
• 关键词: ヌクレオチド除去修復; 色素性乾皮症; XPA; ERCC1; RPA; 蛋白質間相互作用; two-hybrid system

酵母two-hybrid systemを用いたスクリーニングにより、XPA結合蛋白質として、RPAの34kDa(p34)サブユニットを同定し、すでに報告している。RPAはp70、p34、p11よりなるヘテロ三量体であるが、XPAはp34だけでなくp70とも結合した。また種々の組換え短縮XPAを作成し、p70との結合にはXPAの中央部分が、p34との結合にはN末端部分がそれぞれ必要であることを明らかにした。さらに、XPAの損傷DNAに対する結合能がRPAの共存により高まることを示した。XPAのRPA結合領域は、以前に決定したERCC1結合領域とは異なっていたので、XPA/RPA/ERCC1複合体の形成を調べたところ、その複合体の存在を確認した。次に、これらの蛋白質間の結合の動態をBIAにより解析した。センサーチップ上に固定化したXPAに対してRPAはすばやく結合しすばやく解離するが、ERCC1はゆっくり結合しゆっくり解離した。XPAのRPA、ERCC1に対する解離定数はそれぞれ1.9X10^<-8>M、2.5X10^7Mであった。また、RPAがXPAに結合した後でもERCC1はXPAに結合できるが、ERCC1がXPAに結合した後ではRPAはXPAに結合できなかった。この結果は、複合体の形成過程において、3つのコンポーネントの結合に順序があることを示唆している。酵母two-hybrid systemを用い、HeLa細胞由来cDNAライブラリーをスクリーニングすることにより、9種類のXPA結合蛋白質のcDNAを単離した。そのうち5つが新規の蛋白質をコードしており、2つ(GH17、HL12)については完全長のcDNAを単離した。GH17は374アミノ酸よりなる41kDaの蛋白質を、HL12は740アミノ酸よりなる87kDaの蛋白質をコードしていた。

The yeast two-hybrid system is used to identify and report XPA binding proteins and RPA 34kDa(p34) binding proteins. RPA p70, p34, p11 The combination of p70 and N-terminal of XPA is necessary. XPA damage to DNA binding can be detected in the presence of RPA. XPA/RPA/ERCC1 complex formation is regulated by the presence of previously determined ERCC1 binding domains. The binding dynamics of proteins in the protein system were analyzed by BIA. XPA is immobilized on ERCC 1 and dissociates on ERCC1. XPA and ERCC1 are associated with a dissociation constant of 1.9X10^<-8>M and 2.5X10 ^7M. ERCC1 is XPA combined, ERCC1 is XPA combined. As a result, the formation process of the complex is very complicated, and the order of the complex formation is very complicated. The yeast two-hybrid system is used, HeLa cells are derived from cDNA fragments, and 9 kinds of XPA-binding proteins are isolated. 5. The protein of the new regulation is isolated from the cDNA of the new regulation. 2.(GH17, HL12) is isolated from the cDNA. GH17 has 374 kDa protein and HL12 has 740 kDa protein.

项目成果

Sakai,Yoshihisa: "CDNA Sequence,chromosomal localization of a novel human protein RBQ-1 which binds to the rotinoblastoma gene product" Genomics. 30. 98-101 (1995)

Sakai，Yoshihisa：“CDNA 序列，与视网膜母细胞瘤基因产物结合的新型人类蛋白 RBQ-1 的染色体定位”基因组学。

Nakane,Hironobu: "High incidence of ultravidet-B-or chemical-carainogen-induced skin tamors in mice locking the xeroderma pigmentosum group A gene" Nature. 377. 165-168 (1995)

Nakane,Hironobu：“锁定着色性干皮病 A 组基因的小鼠中，ultravidet-B 或化学致癌物诱发的皮肤过敏发生率很高”《自然》杂志。

Kuraoka,Isao: "Identification of a damaged-DNA binding domain of the XPA pnotein" Mutation Research. 362. 87-95 (1996)

Kuraoka,Isao：“XPA pnotein 受损 DNA 结合域的鉴定”突变研究。

Levy,Dan D.: "Expression of a transfected DNA repair gene(XPA)in xerodenma pigmartosion graup A cells restares mormal DNA repair and mutagenesis of UV-treated plasmids" Carcinogenesis. 16. 1557-1563 (1995)

Levy，Dan D.：“在干皮病猪群 A 细胞中表达转染的 DNA 修复基因 (XPA) 可恢复正常 DNA 修复和紫外线处理质粒的诱变”致癌作用。

Nagai,Akira: "Enhancement of damage-specific DNA binding of XPA by interaction with the ERCC1 DNA repair protein" Biochemical and Biophysical Research Communications. 211. 960-966 (1995)

Nagai, Akira：“通过与 ERCC1 DNA 修复蛋白相互作用增强 XPA 的损伤特异性 DNA 结合”生物化学和生物物理研究通讯。