DNA除去修復におけるXPA蛋白質の機能解析

XPA蛋白在DNA切除修复中的功能分析

• 批准号: 09253231
• 负责人: 西條 将文
• 金额: $ 2.11万
• 依托单位: Osaka University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
• 财政年份: 1997
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1997 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-09253231/
• 关键词: ヌクレオチド除去修復; 色素性乾皮症; XPA; RPA; ERCC1; TFIIH; two-hybrid system; 皮膚癌

1.抗XPAモノクローナル抗体を作成した。そのうち2クローンは、紫外線照射SV40ミニクロモソームを基質とした試験管内修復反応と、プラスミドDNAの特定の一か所にシスプラチン付加体をもつ基質を用いたインシジョン反応を阻害した。これらの抗体は、XPAの損傷DNAへの結合は阻害しなかったが、RPAおよびERCC1との結合を阻害した。以上の結果より、XPAとRPA、ERCC1との結合は、ヌクレオチド除去修復(NER)の反応過程において重要な役割を果たしていることが示唆された。2.GST-XPA融合蛋白質を用いたpull-down実験で、XPAが紫外線照射DNAと結合したときに、より多くのTFIIHが結合した。この結合がDNAを介したものでないことは、DNAとは結合できるがTFIIHとは結合できないC末端欠損XPAにより確認できた。3.酵母two-hybrid systemによる検索で得られた新規XPA結合蛋白質XAB1は、GTPase活性を有していた。抗XAB1抗体の細胞へのマイクロインジェクションや試験管内修復反応系への添加、XAB1の大部分を除いた条件での試験管内反応の結果より、XAB1はNER反応には直接関与しないことが示唆された。XAB1はXPAのN末端から57アミノ酸残基内に結合することがわかった。この領域は、XPAの修復機能には必須ではないが、核移行に関与するシグナルを含む領域である。4.XPA遺伝子欠損マウスに紫外線を照射して発生させた皮膚癌組織より細胞株を5株樹立した。これらすべての株は、紫外線照射後の不定期DNA合成がみられないことからNER能の欠損は確認されたが、XPA遺伝子欠損マウス由来の線維芽細胞にくらべると紫外線抵抗性を示した。また、3株において、p53遺伝子の変異が検出された。変異はすべてG・C→A・Tトランジションで、紫外線による変異と考えられた。

1. Anti-XPA antibodies were prepared. UV irradiation SV40 UV light irradiation SV These antibodies block the binding of XPA to damaged DNA, RPA to ERCC1. The above results show that the combination of XPA and RPA and ERCC1 is very important in the reverse process of NER. 2.GST-XPA fusion protein is used to pull-down DNA binding, XPA binding to UV-irradiated DNA binding, and TFIIH binding to UV-irradiated DNA binding The binding of DNA is not confirmed by the C-terminal defect of XPA. 3. Yeast two-hybrid system has been developed with new XPA-binding protein XAB1 and GTase activity. Anti-XAB1 antibodies are directly related to the addition of a repair reaction system in the assay tube, and most of the conditions for removing XAB1 from the assay tube result. XAB1 binds to the N-terminal region of XPA at 57 amino acid residues. This domain contains the XPA repair function. 4. XPA cells were damaged by ultraviolet radiation and five skin cancer cells were established. UV-resistant DNA synthesis of XPA cells after UV-irradiation The difference between p53 gene and p53 gene was detected. The difference between G·C and A·T is that the ultraviolet rays are different.

项目成果

Nocentini,Silvano: "DNA damage recognition by XPA protein promotes efficient recruitment of transcription factor IIH" The Journal of Biological Chemistry. 272-37. 22991-22994 (1997)

Nocentini、Silvano：“XPA 蛋白识别 DNA 损伤可促进转录因子 IIH 的有效募集”《生物化学杂志》。

Kobayashi,Takehiro: "Mutations in the XPD gene leading to xeroderma pigmentosum symptoins" Human Mutation. 9. 322-331 (1997)

Kobayashi，Takehiro：“XPD 基因突变导致着色性干皮病症状”人类突变。