DNA修復におけるXPAの機能と紫外線誘発皮膚発癌に伴う遺伝子変化の解析

XPA 在 DNA 修复和与紫外线诱发皮肤癌相关的遗传变化中的功能分析

• 批准号: 11138233
• 负责人: 西條 将文
• 金额: $ 2.05万
• 依托单位: Osaka University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas (A)
• 财政年份: 1999
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1999 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-11138233/
• 关键词: ヌクレオチド除去修復; 色素性乾皮症; XPA; RPA; 皮膚癌; RLGS; dermo-1

(1)XPA中央部のDNA/RPA70結合領域内の保存された荷電アミノ酸をアラニンに置換したXPAを23種類作製し、無細胞修復系で活性を調べたところ、8種類で修復活性が低下していた。このうち、3つで損傷DNAならびにRPA70との結合の低下が、4つでRPA70との結合の低下がみられた。これらの変異部位は、立体構造上近接した位置に存在していた。残りの1つの変異では、損傷DNA、RPA70との結合は正常であった。変異蛋白質のなかに、RPA70との結合が正常でDNAとの結合が低下しているものはなかった。また、修復活性が正常なもののなかに、損傷DNAあるいはRPA70との結合が低下しているものはなかった。(2)XPA遺伝子欠損マウスでの紫外線誘発皮膚発癌過程における遺伝子変化を網羅的に調べるため、XPAマウスの正常皮膚組織、皮膚癌細胞株、皮膚癌組織のDNAについて、RLGS(Restriction Landmark Genomic Scanning)法により約千個のスポットをスクリーニングした。複数の癌で共通に変化しているスポット(減衰12例、増幅7例)のクローニングを行い、6例の既知遺伝子、2例のESTデータベース上の遺伝子が単離された。そのうちの1つであるDermo-1遺伝子は、正常皮膚上皮細胞では発現していないが5種類のXPAマウス由来の皮膚癌細胞株で発現していた。また、Atlas Mouse cDNA Expression Arraysにより、正常細胞に比べ癌細胞で明らかに発現量が減少しているものとしてCyclinD2,HSP-86,mHR21,Sox17,myogenic factor5,BMP-1を確認した。

(1) DNA/RPA70 binding domain in the central part of XPA was preserved, and the activity of 23 kinds of XPA was regulated, and the activity of 8 kinds of XPA was decreased. 3. DNA damage, RPA70, low binding, 4. RPA70, low binding There are different parts of the body, and there are close positions in the three-dimensional structure. 1, DNA damage, RPA70, Normal combination The binding of different proteins and RPA70 is normal. The binding of DNA is low. The repair activity is lower than that of normal DNA and damaged DNA. (2)XPA gene deficiency in the process of UV-induced skin cancer development, XPA gene transformation in the normal skin tissue, skin cancer cell lines, skin cancer tissue DNA detection, RLGS(Restriction Landmark Genomic Scanning) method, about a thousand different types of DNA. Multiple cancer cases were common to all patients (attenuation 12 cases, amplification 7 cases), and were isolated from each other. 6 cases had known genes, 2 cases had EST genes. Dermo-1 gene was found in normal skin epithelial cells and in skin cancer cell lines derived from 5 types of XPA. Atlas Mouse cDNA Expression Arrays were found in normal cells, but the expression of CyclinD2,HSP-86, mHR21,Sox17,myogenic factor5,BMP-1 was significantly lower than that of cancer cells.

项目成果

Murai Hiroaki: "Studies of in vivo mutations in rpsL transgene in UVB-irradiated epidermis of XPA -deficient mice"Mutation Research. (in press).

Murai Hiroaki：“XPA 缺陷小鼠 UVB 照射表皮中 rpsL 转基因体内突变的研究”突变研究。

Ikegami, Takahisa: "Resonance assignments, solution structure, and backbone dynamics of the DNA-and RPA-binding domain of human repair factor XPA"Journal of Biochemistry. 125・3. 495-506 (1999)

池上隆久：“人类修复因子 XPA 的 DNA 和 RPA 结合结构域的共振分配、溶液结构和骨架动力学”《生物化学杂志》125・3（1999 年）。

Ichikawa, Minoru: "Decreased UV sensitivity mismatch repair activity and abnormal cell cycle check points in skin cancer cell linesderived from UVB-irradiated XPA-deficient mice"Mutation Research. (in press).

Ichikawa, Minoru：“来自 UVB 照射的 XPA 缺陷小鼠的皮肤癌细胞系中紫外线敏感性错配修复活性降低和细胞周期检查点异常”突变研究。