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ヌクレオチド除去修復におけるXPA蛋白質の機能解析

XPA蛋白在核苷酸切除修复中的功能分析

基本信息

批准号：
08264220
负责人：
西條将文
金额：
$ 2.3万
依托单位：
Osaka University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
1996
资助国家：
日本
起止时间：
1996 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

我々は以前に、XPA蛋白質(XPA)の損傷DNA結合能がRPAにより上昇すること、また抗XPA抗体による免疫沈降で細胞抽出液よりRPAがXPAと共沈することを示しているが、ヌクレオチド除去修復(NER)におけるXPAとRPAの結合の意味については明らかではなかった。そこで、RPAの70kDaサブユニットとの結合に必要な領域を含むXPAのDNA結合ドメインに対するモノクローナル抗体を作成した。得られた抗体のうち2クローンは、試験管内無細胞DNA修復反応を阻害した。またこれらの抗体は、XPAとRPAの結合を阻害したが、XPAの損傷DNA結合活性は阻害しなかった。これらの結果より、XPAとRPAの結合のNERにおける重要性が示唆された。出芽酵母におけるXPAのホモローグであるRad14も酵母RPAと結合したので、酵母RPA各サブユニットの遺伝子(RFA1,2,3)に突然変異を導入し、UV高感受性株、温度(高温および低温)感受性変異株のスクリーニングをプラスミド・シャッフリング法により行った。UV高感受性株はrfa1変異株で2株、温度感受性変異株はrfa1変異株で1株、rfa2変異株で4株、rfa3変異株で3株の計8株を単離し、変異部位を決定した。酵母two-hybrid systemを用いて得られた5種類のXPAと結合する新規の蛋白質(XPA binding protein;XAB1-5)のうち、XAB1はGTP/ATP結合モチーフ、XAB2はTPRモチーフを持つことがわかった。

In the past, XPA protein (XPA) damaged DNA binding energy increased, anti-XPA antibodies increased, cell aspirate increased, XPA co-precipitated, XPA protein removed repair (NER) increased, XPA protein binding increased, anti-XPA antibodies increased, XPA protein removed repair (NER) decreased, XPA protein removed repair increased, XPA protein removed, XPA protein removed. The 70kDa DNA binding site of RPA is necessary for the production of anti-RPA antibodies. Antibodies were found to inhibit cell-free DNA repair in the test tubes. Antibodies, XPA binding inhibitors, XPA damage DNA binding inhibitors The importance of the combination of XPA and RPA is demonstrated. Rad14: Yeast RPA and RFA binding, yeast RPA and RFA genes (RFA1,2,3) are introduced into the mutant, UV sensitive strain, temperature (high temperature or low temperature) sensitive mutant strain. 2 plants with high UV sensitivity, 1 plant with high temperature sensitivity, 4 plants with high temperature sensitivity, 3 plants with high temperature sensitivity, 8 plants with high temperature sensitivity, 1 plant with high temperature sensitivity, 4 plants with high temperature sensitivity, 3 plants with high temperature sensitivity, 8 plants with high temperature sensitivity, 3 plants with high temperature sensitivity, 4 plants with high temperature sensitivity, 3 plants with high temperature sensitivity, 3 plants with high temperature sensitivity, 4 plants with high temperature sensitivity, 3 plants with high temperature sensitivity. The yeast two-hybrid system was used to obtain 5 kinds of XPA binding proteins (XAB1 -5), XAB1 GTP/ATP binding proteins, XAB2 TPR binding proteins.