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DNA修復におけるXPA蛋白質の機能とその欠損による紫外線誘発皮膚発癌の解析

XPA蛋白在DNA修复中的功能分析以及其缺陷引起的紫外线诱发的皮肤癌

基本信息

批准号：
10151226
负责人：
西條将文
金额：
$ 2.05万
依托单位：
Osaka University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas (A)
财政年份：
1998
资助国家：
日本
起止时间：
1998 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-10151226/
关键词：
ヌクレオチド除去修復色素性乾皮症 XPA RPA 皮膚癌 RLGS dermo-1 遺伝子欠損マウス

项目摘要

(1) ヌクレオチド除去修復(NER)において、XPAとRPAの結合が重要な役割を果たしている。欠失XPAを用いた結合実験およびNMRによる解析より、XPA中央部のZnフィンガー領域がRPAp70のDNA結合ドメインと結合することを明らかにした。この結合は高塩濃度で解離するので、Znフィンガー領域に存在する酸性アミノ酸のクラスターが結合に関与していると考えられる。(2) XPAのN末端は、RPAp34との結合領域である。この領域を欠失したXPAを発現させたA群XP細胞では、正常細胞に比べ、紫外線に対してわずかに感受性を示し、DNAからのピリミジンダイマーの除去も低下していた。この細胞の抽出液により試験管内NER反応を行ったところ、正常細胞抽出液とくらべ低下していた。A群XP細胞抽出液にN末端欠失XPA蛋白質を加えた場合にも、同様の結果が得られた。この欠失XPAは、p70との結合領域が残っているのでRPAとは結合できるが、それだけでは十分でなくp34との結合が機能的に重要であることが示唆された。(3) XPA遺伝子欠損マウス由来の紫外線誘発皮膚癌細胞株、皮膚癌組織、および正常皮膚組織よりDNAを抽出し、RLGS法により、皮膚癌細胞および癌組織において共通に変化しているスポット19例についてDNAを単離した。サザンブ口ツティングにより、減衰スポット18例、増幅スポット5例、計23例のDNA断片において癌細胞特異的にゲノム構造の変化が認められた。そのうち6例は既知の遺伝子、2例はESTデータベースにおいて認められた遺伝子であったが、dermo-1遺伝子でのみ皮膚癌細胞における発現の上昇が確認された。その他の15例のDNA断片については発現が認められなかった。

(1)The combination of XPA and RPA is an important part of the repair process. XPA is not used in the middle of the binding process and NMR analysis, XPA in the central part of the zinc oxide region, RPAp70 in the DNA binding process and binding process. This combination is related to the dissociation of high concentrations of Zn and the presence of acidic acids in the field. (2)XPA N terminal, RPAp34 binding domain. XPA was found in group A XP cells, normal cells, and ultraviolet light. The cell extract was extracted from the test tube and the normal cell extract was extracted from the test tube. Group A XP cell extract N-terminal deficiency of XPA protein in the case of addition, the same results The missing XPA, p70, and combination fields are incomplete, and the missing RPA, p34, and combination functions are important. (3)The origin of XPA gene damage is UV-induced skin cancer cell lines, skin cancer tissues, and normal skin tissues. DNA was extracted from skin cancer cells and normal skin tissues by the RLGS method. DNA was isolated from 19 cases of skin cancer cells and cancer tissues. DNA fragments were detected in 18 cases, 5 cases and 23 cases respectively. 6 cases of known gene, 2 cases of EST gene, dermo-1 gene, skin cancer cells, and the occurrence of rise were confirmed. In 15 cases, DNA fragments were detected.