サイトカイン補充遺伝子療法のための自殺遺伝子を介した細胞レベルでの調節法の開発

开发用于细胞因子替代基因治疗的细胞水平自杀基因介导的调节方法

• 批准号: 07274260
• 负责人: 小澤 敬也
• 金额: $ 2.18万
• 依托单位: Jichi Medical University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
• 财政年份: 1995
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1995 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-07274260/
• 关键词: 遺伝子治療; 自殺遺伝子; アポトーシス; Fas; エストロゲン受容体; サイトカイン; G-CSF

長期に亘る注射を必要とするサイトカイン療法では患者の精神的・肉体的苦痛が大きく、遺伝子治療によりサイトカインを体内で持続発現させる方法の確立が期待される。その際、遺伝子発現のレベルでサイトカイン産生量を調節することは現状ではまだ困難であり、細胞レベルでの調節が鍵となる。ヘルペスウイルス・チミジンキナーゼ(HSV-tk)遺伝子を自殺遺伝子としてサイトカイン遺伝子と共に線維芽細胞に導入しておき、プロドラッグのガンシクロビル投与により細胞を破壊する方法では、必ずしも満足のいく結果は得られていない。そこで本研究では、新規自殺遺伝子としてアポトーシス誘導遺伝子のFas/エストロゲン受容体キメラ遺伝子MfasER(Fas受容体のアポトーシス誘導に必須な領域とエストロゲン受容体のリガンド結合領域のキメラ蛋白質をコードする遺伝子)を利用することを試みた。MfasERベクター(pCMXMfasER)を導入したマウス線維芽細胞(L929)では、エストロゲン処理によりアポトーシスが短時間で効率良く誘導されることが、形態学的観察、XTTアッセイによる細胞増殖動態の検討、DNAの断片化の検出(細胞質分画から抽出したDNAのアガロースゲル電気泳動、細胞質中のヒストン結合DNA断片を検出するCell Death Detection ELISA)により確認された。そこで、さらにG-CSF発現ベクター(BCMGSNeo-GCSF)を導入しておくと、エストロゲン処理により細胞死が誘導され、それに伴って培養上清中の単位時間当たりのG-CSF産生量が急速に低下すること、即ち、G-CSF産生量の細胞レベルでの調節が可能であることが判明した。また、従来のHSV-tk/ガンシクロビル法との比較実験により、反応が速やかであること、細胞周期に関係なく細胞を破壊できることなど、本システムが幾つかの利点を有することが明らかとなった。

Long-term injection is necessary, and it is expected that the method of mental and physical pain of patients will be established. The regulation of the production of protein and protein is the key to the regulation of protein and protein production. The HSV-tk gene is a suicide gene, and the HSV-tk gene is a suicide gene, and the HSV-tk gene is a suicide gene, and the HSV-tk gene is a suicide gene, and the HSV-tk gene is a suicide gene. In this study, we proposed a new approach to the utilization of suicide gene MfasER(Fas receptor receptor protein receptor), which is required for the induction of Fas receptor. MfasERベクター (pCMXMfasER) was introduced into the cell line (L929), and the cell growth dynamics and DNA fragmentation were investigated.(Cell Death Detection ELISA for detection of DNA fragments in cytoplasm) It was found that G-CSF production decreased rapidly during induction of cell death and cell cycle regulation in culture supernatant when G-CSF production decreased rapidly during induction of BCMGSNeo-GCSF. The HSV-tk/HSV-t-t/HSV-t/HSV-t-t/HSV-t/HSV-

项目成果

Hideki Suzuki: "A synergistic increase in transplantable peripheral blood stem cells in mice by co-administration of recombinant human IL-6 and recombinant hyman G-CSF." Transplantation. 59. 1596-1600 (1995)

Hideki Suzuki：“通过联合施用重组人 IL-6 和重组海曼 G-CSF，可协同增加小鼠中可移植的外周血干细胞。”

Naoki Uemura: "Pure red cell aplasia caused by parvovoirus B19 infection in a renal transplant recipient." Eur. J. Haematol.54. 68-69 (1995)

Naoki Uemura：“肾移植受者中由细小病毒 B19 感染引起的纯红细胞再生障碍性贫血。”

Masaki Kokubun: "Apoptosis-mediated regulation of granulocyte colony-stimulating factor production by genetically modified fibroblasts." Blood. 86(supple 1). 1000a (1995)

Masaki Kokubun：“基因修饰成纤维细胞对粒细胞集落刺激因子产生的凋亡介导调节。”

Toshihisa Tsuruta: "Effects of myeloid cell growth factors on alkaline phosphatase, myeloperoxidase, defensin and G-CSFR mRNA expression in hematopoietic cells of normal individuals and myeloid disorders" Brit. J. Haematol.(in press). (1996)

Toshihisa Tsuruta：“骨髓细胞生长因子对正常个体和骨髓疾病的造血细胞中碱性磷酸酶、髓过氧化物酶、防御素和 G-CSFR mRNA 表达的影响”Brit。

Masaki Kokubun: "A novel strategy for supplemental gene therapy : Apoptosis-mediated regulation of cytokine production by genetically modified fibroblasts." Gene Therapy. 2. 681 (1995)

Masaki Kokubun：“补充基因治疗的新策略：基因修饰成纤维细胞对细胞因子产生的凋亡介导调节。”