造血幹細胞を標的とした遺伝子治療のための新規選択的増幅遺伝子の開発

开发用于针对造血干细胞的基因治疗的新型选择性扩增基因

• 批准号: 09250214
• 负责人: 小澤 敬也
• 金额: $ 1.47万
• 依托单位: Jichi Medical University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
• 财政年份: 1997
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1997 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-09250214/
• 关键词: 遺伝子治療; 遺伝子導入; 造血幹細胞; 選択的増幅遺伝子; G-CSF受容体; エストロゲン受容体; 増殖シグナル; 分化シグナル

遺伝子導入造血幹細胞を選択的に増幅させるための制御遺伝子として、G-CSF受容体エストロゲン受容体融合遺伝子(GCRER遺伝子)を選択的増幅遺伝子として開発中である。これは、G-CSF受容体の増殖シグナルを利用し、その制御スイッチとしてエストロゲン受容体を用いたものである。今年度は、分化シグナルドメインに変異を導入したものを構築し、より増幅優位に働くかどうか検討した。具体的には、G-CSF受容体部分のTyr703をPheに置換した選択的増幅遺伝子[Δ(5-195)Y703F-GCRER]を分化誘導可能な32D細胞に遺伝子導入し、エストロゲン刺激に対する増殖・分化反応について解析した。その結果、32D細胞にΔ(5-195)GCRER遺伝子を導入した場合は、G-CSF及びエストロゲン刺激で好中球へ分化したが、Δ(5-195)Y703F-GCRER遺伝子を導入した場合は、エストロゲン刺激では未分化な状態で増殖を続けた。即ち、Tyr703変異により分化シグナルが抑制され、選択的増幅遺伝子としてより効率が上がることが期待される。尚、致死量放射線照射後、選択的増幅遺伝子を導入した骨髄細胞で造血系を再構築したマウスを用いて、エストロゲン投与により遺伝子導入造血幹細胞を体内で増幅させることができるかどうか検討中であるが、最終的な結論を出すにはまだ至っていない。その他、新規二量体化誘導システムとして、GyrB遺伝子とdimerizerのcoumermycinを用いた方法についても検討した。即ち、G-CSFR-GyrBキメラ蛋白質をコードする遺伝子が選択的増幅遺伝子として機能するかどうかBa/F3細胞を用いて調べたところ、エストロゲン受容体を用いた方法の方が効率がよいことが判明した。

The gene is introduced into the hematopoietic stem cell selection system, and the G-CSF receptor fusion gene is introduced into the hematopoietic stem cell selection system. The growth of G-CSF receptors is the most important factor affecting the growth of G-CSF receptors. This year, the division of the company into different categories of products, such as construction, increase in the size of the company's products. Specifically, Tyr703 in the receptor portion of G-CSF was replaced by a selected amplification gene [Δ(5-195) Y703F-GCRER], which could induce differentiation in 32D cells. The results showed that Δ(5-195)GCRER gene was introduced into 32D cells and stimulated by G-CSF and T-CSF to differentiate well. Δ(5-195) Y703F-GCRER gene was introduced into 32D cells and stimulated by T-CSF to proliferate in undifferentiated state. That is, Tyr703 is different, and the difference between the two groups is suppressed, and the increase in the number of selected groups is expected. After lethal dose radiation exposure, the selected amplitude-increasing gene was introduced into the bone marrow cells, and the hematopoietic system was reconstructed. In vivo, the amplitude-increasing gene was introduced into the hematopoietic stem cells, and the final conclusion was drawn. In addition, the new quantitative induction method, GyrB gene and dimerizer and coumermycin are used in the middle of the study. G-CSFR-GyrB is the most effective method for determining the protein content of Ba/F3 cells.

项目成果

Yoshikazu Maeda: "Gene transfer into vascular cells using adeno-associated virus(AAV)vectors" Cardiovascular Res.35. 514-521 (1997)

Yoshikazu Maeda：“使用腺相关病毒 (AAV) 载体将基因转移到血管细胞”Cardioangio Res.35。

Keiko Ito: "Development of a novel selective amplifier gene for controllable expansion transduced hematopoietic cells" Blood. 90. 3884-3892 (1997)

Keiko Ito：“开发用于可控扩增转导造血细胞的新型选择性放大器基因”血液。

Masaki Kokubun: "Apoptosis-mediated regulation of recombinant human granulocyte colony-stimulating factor production by genetically engineered fibroblats" Gene Therapy. (in press). (1998)

Masaki Kokubun：“基因工程成纤维细胞对重组人粒细胞集落刺激因子产生的凋亡介导调节”基因治疗。

Richard Surosky: "Adeno-associated virus Rep proteins target DNA sequences to a unique locus in the human genome" J.Virol.71. 7951-7959 (1997)

Richard Surosky：“腺相关病毒 Rep 蛋白将 DNA 序列靶向人类基因组中的一个独特位点”J.Virol.71。

Masashi Urabe: "A novel dicistronic AAV(adeno-associated virus)Vector using a short IRES(internal tibosome entry site) segment derived from hepatitis C virus genome" Gene. 200. 157-162 (1997)

Masashi Urabe：“一种新型双顺反子 AAV（腺相关病毒）载体，使用源自丙型肝炎病毒基因组的短 IRES（内部核糖体进入位点）片段”基因。