アデノ随伴ウイルスベクター系の開発と新規自殺遺伝子を用いた細胞制御法への応用

腺相关病毒载体系统的开发及其在使用新型自杀基因的细胞控制方法中的应用

• 批准号: 08266261
• 负责人: 小澤 敬也
• 金额: $ 1.73万
• 依托单位: Jichi Medical University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
• 财政年份: 1996
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1996 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-08266261/
• 关键词: 遺伝子治療; 遺伝子導入; AAVベクター; パッケージング細胞株; 遺伝子組込み; 自殺遺伝子; 細胞制御

新しい遺伝子導入用ベクターとして安全性の高いアデノ随伴ウイルス(AAV)ベクターが注目されているが、その作製法が煩雑であることなど、未解決の課題も多い。本研究では、ベクター作製用のパッケージング細胞株の樹立に向けた基礎的検討を行った。Cre-loxP系を応用した新しいスイッチ機構により、細胞毒性を有するRep蛋白質の制御を試み、10^8-10^9particles/10cm dishのAAVベクターを作製できた。但し、その都度トランスフェクションにより作製する従来法に比べると、ベクターの力価が低く、また長期間その性質を維持するのが困難であるため、さらに効率の良い細胞株の作製が必要である。また、AAVベクターによる遺伝子導入効率を種々の細胞を用いて検討したところ、神経細胞、内皮細胞、平滑筋細胞、心筋細胞、神経膠芽腫細胞株などで良好であり、リンパ球などの浮遊細胞や神経芽腫細胞株への導入効率は低かった。さらに、将来的な方法として期待される第19番染色体部位特異的遺伝子組込み法(TVI:targeted vector integration)に関する基礎的検討では、Rep78/68とITRが重要な働きをしていることが判明した。その他、骨髄移植後再発白血病に対するGVL(移植片対白血病)効果を期待したドナーリンパ球輸注療法の安全性を高める工夫について検討した。即ち、副作用として問題となる重症GVHD(移植片対宿主病)対策として、新規自殺遺伝子のアポトーシス誘導遺伝子を用いたドナーリンパ球の制御法の可能性について、基礎的検討を進めた。具体的には、Fas/エストロゲン受容体キメラ遺伝子を導入しておき、細胞死をエストロゲンで誘導することを試みた。

When you use the new information system, you need to know that there are many problems that have not been solved, and that there are many problems that have not been solved. (AAV) please pay close attention to the situation. In this study, the cell line was used as an indicator of the growth of the cell line in this study. The Cre-loxP system uses the new equipment, the cell toxicity includes the Rep protein to control the virus, and 10 ^ 8-10 ^ 9 to 10cm dish the AAV to make the toxicity. However, it is necessary to make a comparison between the two groups, such as the low level of health, long-term and long-term maintenance of environmental pollution, and the rate of environmental pollution is poor. The infestation rate of several kinds of spores, such as the cell cycle, the AAV cell, the endothelial cell, the smooth muscle cell, the heart cell, the sprout cell, the cell strain, the cell line, the cell line, the In the future, we look forward to the identification of the 19th chromosome site specificity (TVI:targeted vector integration), the importance of the Rep78/68 ITR, and the importance of the diagnosis. He

项目成果

Hiroyuki Mano: "Tec protein-tyrosine kinase is an effector moleccule of Lyn protein-tyrosine kinase." FASEB J.10. 637-642 (1996)

Hiroyuki Mano：“Tec 蛋白酪氨酸激酶是 Lyn 蛋白酪氨酸激酶的效应分子。”

Yoshihiro Yamashita: "Deletion of Src homology 3 domain results in constitutive activation of Tec protein-tyrosine kinase." Jpn.J.Cancer Res.87. 1106-1110 (1996)

Yoshihiro Yamashita：“删除 Src 同源 3 结构域会导致 Tec 蛋白酪氨酸激酶的组成型激活。”

Akira Miyazato: "Tec protein tyrosine kinase is involved in the signaling mechanism of granulosite colony-stimulating factor receptor." Cell Growth & Diff.7. 1135-1139 (1996)

Akira Miyazato：“Tec 蛋白酪氨酸激酶参与颗粒集落刺激因子受体的信号传导机制。”

Hideki Suzuki: "Interleukin-6 and granulocyte colony-stimulating factor cynergistically increase peripheval blood progenitor cells in myelosuppressive mice." Jpn.J.Cancer Res.87. 938-944 (1996)

Hideki Suzuki：“白细胞介素 6 和粒细胞集落刺激因子可协同增加骨髓抑制小鼠的外周血祖细胞。”

小澤敬也: "遺伝子治療" 羊土社, 110 (1997)

小泽圭也：《基因疗法》Yodosha，110 (1997)