顆粒球コロニ-刺激因子(GーCSF)のレセプタ-結合ドメインの検索とその意義

粒细胞集落刺激因子（G-CSF）受体结合域的寻找及其意义

• 批准号: 03671176
• 负责人: 小澤 敬也
• 金额: $ 1.34万
• 依托单位: The University of Tokyo
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for General Scientific Research (C)
• 财政年份: 1991
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1991 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-03671176/
• 关键词: 顆粒球コロニ-刺激因子; GーCSF; レセプタ-結合ドメイン; GーCSFレセプタ-; 抗GーCSF抗体; エピト-プ・マッピング; RTーPCR法

GーCSFは単一の遺伝子からalternative splicingによりa型とb型の2つの分子種が産生される。前者はLeu35の後にアミノ酸が3個付加され、その生物活性は後者の約1/10である。そこで、このアミノ酸挿入部位近傍がGーCSFレセプタ-との結合に重要であると考え、以下の実験を行った。まず、 ^<125>I標識GーCSFbの好中球への結合実験において、非標識のGーCSFa,bならびに各種抗GーCSF抗体による結合阻害反応を調べた。予想通り、GーCSFaのレセプタ-への親和性はGーCSFbの約1/10であった。抗GーCSF抗体についてはさらに、ヒト骨髄細胞を用いた好中球コロニ-形成系およびGーCSF依存性増殖を示すNFS60細胞の液体培養系においてGーCSFに対する中和活性を調べた。また、各抗体のGーCSFへの結合能についてはenzyme immunoassay(EIA)法により検討した。次に、GーCSFbのa.a.^<1-30>,a.a.^<31-60>,a.a.^<61-90>,a.a.^<91-120>およびa.a.^<23-44>に相当する各ペプチドを合成し、各抗GーCSF抗体との反応性をEIA法で調べ、エピト-プ・マッピングを行った。その結果、中和活性とレセプタ-結合阻害活性を有する抗GーCSF抗体(レセプタ-結合ドメイン近傍を認識すると考えられる)がアミノ酸挿入部位近傍のペプチド(a.a.^<23-44>)を認識したことから、このペプチド近傍がGーCSFのレセプタ-結合ドメインであると推定される。したがって、GーCSFaにおける3ケのアミノ酸挿入がそのGーCSFレセプタ-への結合を阻害したものと考えられ、GーCSFaの生物活性の低下が分子構造の上から説明できるものと思われる。尚、GーCSFa mRNAとGーCSFb mRNAを識別することができるRTーPCR/HphI分析法を確立し、ストロ-マ細胞の産生するGーCSF mRNAのタイプを調べたところ、GーCSFb mRNAが主体であることが判明した。

G "CSF", "alternative splicing", "a", "b", "2", "molecular", "health". In the former, there were three doses of Leu35 plus acid, and the latter was about 1ppm after bioactivity. The following information is available in the following areas: G

项目成果

K.Inokuchi: "A possible correlation between the type of bcrーabl hybrid mRNA and Platelet count in Philadelphiaーpositive chronic myelogenous leukemia" Blood. 78. 3125-3127 (1991)

K.Inokuchi：“费城阳性慢性粒细胞白血病中 bcrabl 杂合 mRNA 类型与血小板计数之间的可能相关性”《血液》78. 3125-3127 (1991)。

K.Tani: "Possible pathophysiological roles of GーCSF in myelodysplastic syndromes(MDS):A case report" Myelodysplastic syndrome and Cytokines. 161-170 (1991)

K.Tani：“G-CSF 在骨髓增生异常综合征 (MDS) 中的可能病理生理作用：病例报告”骨髓增生异常综合征和细胞因子 161-170 (1991)。

K.Ozawa: "Regulatory Production of granulocyte colonyーstimulating factor(GーCSF)by stromal cells" Hematopoietic Growth Factors. 55-81 (1991)

K. Ozawa：“基质细胞调节粒细胞集落刺激因子 (G-CSF) 的产生”造血生长因子 55-81 (1991)。

S.Asano: "Several approches to improvement of interferonーalpha therapy in chronic myelogenous leukemia(CML)" Eur.J.Cancer.

S.Asano：“改善慢性粒细胞白血病 (CML) 干扰素 α 疗法的几种方法”Eur.J.Cancer。

S.Irie: "Alternation therapy with antileukemic agents and recombinant human granulocyte colonyーstimulating factor for refractory anemia with excess of blasts in transformation" Am.J.Aed.Sci.

S.Irie：“用抗白血病药物和重组人粒细胞集落刺激因子治疗转化中原始细胞过多的难治性贫血”Am.J.Aed.Sci。