植物種子のジベレリン誘導性システインプロテイナーゼとその機能の解明

阐明赤霉素诱导的半胱氨酸蛋白酶及其在植物种子中的功能

• 批准号: 08253201
• 负责人: 阿部 啓子
• 金额: $ 1.34万
• 依托单位: The University of Tokyo
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
• 财政年份: 1996
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1996 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-08253201/
• 关键词: ジベレリン; システインプロテイナーゼ; CDNAクローニング

コムギ発芽1日目種子より約50万プラークからなるcDNAライブラリーを作製し、コメのCPであるオリザインγのコード領域を含むcDNA断片をプローブとして55℃、2×SSC/0.1%SDSの条件でスクリーニングを行い、6つの陽性クローンを得た。これらの制限酵素地図を作製したところ、すべて同じmRNA由来だと考えられた。そのうちの1つWCP122を解析したところ、Cys-His-Asnの触媒トライアドを有しており、CPをコードしていることが確認された。推定アミノ酸配列はオリザインγ、アリューレインと高い相同性を示し、アミノ酸配列中には、液胞ターゲッティングシグナルも存在していた。一般に植物種子中には複数種のCPが存在し、貯蔵タンパク質のプロテオリシスを調節しているといわれている。そこで、コムギ種子内のCPの動態を詳細に解析するため、さらにオリザインβのコード領域を含むcDNA断片をプローブとして用いた50℃、2×SSC/0.1%SDSの条件でスクリーニングを行った。解析の結果得られた32個の陽性クローンはWCP122とは異なる3種類(WCP133、WCP92/WCP211、WCP81B)に大別され、各々別種のCPをコードすることが判明した。このうちWCP92とWCP211は塩基レベルで91.6%、アミノ酸レベルで95.8%ときわめてよく似ていた。以上得られたクローンのうち、WCP133はオリザインαと82.9%、WCP92/WCP211はオリザインβと83.8%/83.4%、WCP122はオリザインγと82.4%と非常に高い相同性を示した。

About 500,000 cDNA fragments were produced in the seed of the first day of germination, and 6 positive fragments were obtained under the conditions of 55℃, 2×SSC/0.1%SDS. The origin of this restriction enzyme is unknown. WCP122 analysis, Cys-His-Asn contact, CP identification. It is estimated that the acid alignment is different from the high identity, and the acid alignment is different from the high identity. In general, there are several kinds of CP in plant seeds, and the quality of storage is regulated. The dynamics of CP in seeds were analyzed in detail under the conditions of 50℃, 2×SSC/0.1% SDS. The analysis results showed that 32 positive samples were identified from WCP122 and three different species (WCP133, WCP92/WCP211, WCP81B). WCP92: WCP211: 91.6%; WCP92: 95.8% WCP133, WCP92/WCP211, WCP122 and WCP133 were found to have high similarity.

项目成果

M.Kuroda et al: "Oryzacystatins exhibit growth-inhibitory and lethal effects on differnt species of bean insect pests,Callosobruchus chinensis (Coleoptera) and Riptortus clavatus (Hemiptera).Biosci.Biotech." Biosci.Biotech.Biochem.60. 209-212 (1996)

M.Kuroda 等人：“Oryzacystatins 对不同种类的豆类害虫，如 Callosobchus chinensis（鞘翅目）和 Riptortus clavatus（半翅目）表现出生长抑制和致死作用。Biosci.Biotech。”

Y.Kusakabe et al: "GusT27 and Closely Related G-protein-coupled Receptors are Localized in Taste Buds Together with Gi-protein α-Subuhit" Chem.Senses. 21. 335-340 (1996)

Y.Kusakabe 等人：“GusT27 和密切相关的 G 蛋白偶联受体与 Gi 蛋白 α-Subuhit 一起定位于味蕾”Chem.Senses 21. 335-340 (1996)。

M.Abe et al: "Structural organization of the gene encoding corn cystatin." Biosci.Biotech.Biochem.60. 1173-1175 (1996)

M.Abe 等人：“编码玉米胱抑素的基因的结构组织。”

T.Misaka et al: "Sovacvstatin,a novel cysteine proteinase inhibitor in soybean,is distinct in protein structure and gene organization from other cystatins of animal and plan origin." Eur.J.Biochem.240. 609-614 (1996)

T.Misaka 等人：“Sovacvstatin 是一种新型大豆半胱氨酸蛋白酶抑制剂，其蛋白质结构和基因组织与其他动物和植物来源的半胱氨酸蛋白酶抑制剂不同。”

K.Irie et al: "Transgenic rice established to express corn cystatin exhibits strong inhibitory activity against insect gut proteinases." Plant Mol.Biol.30. 149-157 (1996)

K.Irie 等人：“表达玉米半胱氨酸蛋白酶抑制剂的转基因水稻对昆虫肠道蛋白酶表现出很强的抑制活性。”