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培養細胞モデル系によるニューロナルアポトーシスの分子機構

利用培养细胞模型系统研究神经元凋亡的分子机制

基本信息

批准号：
08256202
负责人：
小池達郎
金额：
$ 0.96万
依托单位：
Hokkaido University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
1996
资助国家：
日本
起止时间：
1996 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-08256202/
关键词：
神経成長因子アポトーシスストレス蛋白 BiP GRP78 上頚神経節顆粒細胞

项目摘要

神経成長因子(NGF)存在下で交感神経様細胞に分化させたPC12細胞は、NGF除去に伴い細胞死を起こす。この細胞死に伴い、BiP/GRP78遺伝子の発現が増加することを見いだした。BiPは小胞体に存在するHSP70ファミリー蛋白質の1つで、シャペロン蛋白質として働きを持ち、合成された分泌性蛋白質の放出や小胞体-核シグナル伝達に重要な役割を担っている。神経細胞死制御における小胞体の関与を明らかにするために、このストレス蛋白質BiP/GRP78の発現を、中枢、及び末梢の神経初代培養系の細胞死において検討した。神経細胞死に伴うBiP/GRP78mRNAの増加は、ラットの小脳顆粒細胞の培養系でも確かめられた。生後7日のラット小脳から単離した顆粒細胞は、通常のカリウム濃度(5.4mM)下では、培養5日(DIV6)で変性を始め7日(DIV8)にはほぼ死滅する。BiP/GRP78発現増加のピークはDIV6の細胞から得られたRNAに対して確認され、DIV3の細胞の値の1.7〜2.2倍であった。一方、培養上頚神経節(SCG)細胞はNGF除去後、24時間には変性を初め、36時間には細胞体の萎縮・突起の崩壊を起こし、細胞死に至ることがわかっている。この細胞死に伴うBiP/GRP78の発現増加を調べたところ、mRNAレベルでは検出できなかったが、抗BiP抗体を用いた免疫組織化学的手法により、蛋白質レベルでの増加が確認された。細胞質のストレス蛋白質であるHSP70の発現量はmRNAでも蛋白質レベルでも細胞死の過程で変化しなかった。このことは、細胞死において、ストレス蛋白質のなかでBiP/GRP78の発現が、特異的に制御されることを示唆している。

PC12 cells differentiate in the presence of NGF, and NGF removal initiates cell death. The development of BiP/GRP78 gene in these cells has increased. BiP is responsible for the production and synthesis of secretory proteins and the release of HSP70-related proteins from small cells. The Relationship between Cell Death and Cell Death in Primary Cultures of Neuro Cells and the Development of BiP/GRP78 in Neuro Cells Neuronal cell death is accompanied by an increase in BiP/GRP78 mRNA, and the culture line of small granular cells has become more and more accurate. Granulosa cells from day 7 after birth were killed at the usual concentration (5.4 mM), and from day 5 (DIV6) to day 7 (DIV8). BiP/GRP78 expression increased by 1.7 - 2.2 fold compared with DIV 6 cells. After NGF was removed, SCG cells were cultured for 24 hours, and the cell body atrophied and the process collapsed for 36 hours. The increase in expression of BiP/GRP78 in these cells was confirmed by immunohistochemical staining with anti-BiP antibodies and protein. The expression of HSP70 in cytosol and mRNA in cytosol is related to the process of cell death. BiP/GRP78 is a protein that can be expressed and controlled in cells.