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膜脱分極による遅延性遺伝子発現機構

膜去极化导致基因表达延迟的机制

基本信息

批准号：
08271201
负责人：
小池達郎
金额：
$ 1.28万
依托单位：
Hokkaido University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
1996
资助国家：
日本
起止时间：
1996 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-08271201/
关键词：
神経活動脱分極ベラトリジン上頚神経節遺伝子発現

项目摘要

神経活動に伴う膜脱分極は、神経細胞の生存・機能維持及び形成されたシナプス結合回路の長期的な安定性をもたらすと予想される。ラット上頚神経節(SCG)の培養系についての膜脱分極下で発現の変化する遺伝子の探索、及びSCG細胞のNGF除去後の細胞死に関し膜脱分極によるNa+の流入に依存した神経細胞生存/死制御の機構の存在を明らかにした。1)神経細胞の脱分極に伴い遅延性に発現する遺伝子の単離SCG細胞を用いて高カリウム処理による脱分極に伴い遅延性に発現の変化する遺伝子をRAP-PCR法を用いて探索した。対照と比較したところ、25本のバンドに変化が見られた。それらのクローニングを行い、15本のバンドに関したcDNAを持つと思われる約50個のプラスミドを得た。脱分極に対する応答の再現性を確かめる為、プラスミドDNAをドットブロットしたメンブレンを準備し、レバースノーザンを行った。その結果、高カリウムによる脱分極処理で発現の増加する3種のクローン(RAP1-11,1-16,3-2)と発現の減少する3種のクローン(RAP1-2,2-9,4-24)について再現性が確かめられた。うち4本(RAP1-2,1-11,3-2,4-24)に付いてシークエンシング、ホモロジー検索を行ったところ、3本は未知で、1本(RAP1-11)は、登録はあるが機能の不明なヒト脳で発現する遺伝子クローン36066と高い相同性があった。2)ベラトリジンによる脱分極に伴うナトリウム流入に依存した神経細胞の生存ベラトリジンはNa+チャンネルの活性化剤である。1μM以下の濃度ではNa+の流入のみが観測された。更に低濃度のベラトリジン(0.25〜0.75μμM)は細胞死を遅延せることがわかった。この細胞死遅延効果は明らかに細胞外のNa+に依存しており、ベラトリジンによる細胞内Na+濃度の増加と相関していた。このことは、神経細胞の生存/細胞死制御に関しNa+を介した機構が存在することを示唆している。

The activity of the nervous system is accompanied by membrane depolarization, the survival and function maintenance of the nervous system cells, and the long-term stability of the long-term stability of the binding circuit formed by the nervous system. Exploration of the culture system of the Rakuten SCG (SCG) membrane detachment and transformation, and the NG of SCG cells After F is removed, the cell is dead and the membrane is separated. 1) The depolarization of the nerve cells is accompanied by the ductility of the SCG cells. The reason is that the polarization is separated and the ductility is present, and the RAP-PCR method is used to explore the ductility.対光とComparisonしたところ、25本のバンドに変化が见られた.それらのクローニングを行い, 15 copies of のバンドに关したcDNAをhold つと思われるAbout 50 のプラスミドを得た. The reproducibility of the separation of the poles is the same as the reproducibility of the DNA.ットブロットしたメンブレンをPreparationし、レバースノーザンを行った.そのRESULTS, HIGH カカリウムによるDepolarization treatmentで発appearのincreasing and する 3 kinds of のクローン(RAP1-11,1-16,3- 2) Reproducibility and accuracy of three kinds of のクローン (RAP1-2, 2-9, 4-24) are reduced.うち4 books (RAP1-2,1-11,3-2,4-24)いてシークエンシング,ホモロジー検SOを行ったところ, 3 books not Know it, 1 book (RAP1-11), log in, the function is unknown, the function is unknown, the function is unknown, the function is unknown, the function is unknown, and the function is unknown. 2) The ベラトリジンによる出分polar に accompanying the うナトリウム inflow にdependence した神Cell survival and activation of cells Na + Na+. The concentration of Na+ below 1μM is measured by inflowing into the meter. More low-concentration のベラトリジン (0.25~0.75μμM) can cause cell death and prevent cell death. The effect of prolonging cell death is related to the increase of intracellular Na+ concentration and its dependence on extracellular Na+.このことは、神経 Cell's survival/cell death control に关しNa + を Introduction したMechanism がExistence することをshows instigation している.