フリーラジカル損傷DNAの修復に関与する酵素の研究

参与修复自由基损伤 DNA 的酶的研究

基本信息

批准号：
08264223
负责人：
関周司
金额：
$ 0.83万
依托单位：
Okayama University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
1996
资助国家：
日本
起止时间：
1996 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-08264223/
关键词：
DNA修復酵素 AP endonuclease APEX FEN-1 Endonuclease III homolog 塩基除去修復 cDNA cloning フリーラジカル

项目摘要

フリーラジカルによるDNA損傷の中で,直接または間接に毎日多数生じている塩基欠落部位(APサイト)の修復に関与する酵素及びチミングリコールのようなラジカル損傷ピリミジン塩基の修復に関与する酵素について研究し,以下のような研究成果を得た。APサイトの5′側に切れ目を入れAPサイトの修復開始に関与する哺乳類酵素の主体は,これまで報告してきたAPEX nucleaseであったが,この他に30kDaと39kDaの二種のAP endonucleasesの存在を見出しこれらをマウス腹水肉腫細胞から精製し,性状解析を行い,部分アミノ酸配列を決定した。これら酵素のcDNA cloningを試みているが未だ成功していない。2.APサイト修復においてAPEXの次のステップにflap endounclease (FEN-1 ; DNase IV)が関与して5′ブロックを除くことを示唆した。このことを確かめるために,最近報告された塩基配列を利用してマウスの本酵素cDNAをcloningし,大腸菌で発現してrecombinant FEN-1を得た。3.APEX nuclease,recombinant FEN-1等の精製酵素で,APサイト修復系を構築し,APEX nuclease,FEN-1等がAPサイトの修復に重要な役割を演じていることを示唆した。4.ラジカル損傷DNAに多く見られる損傷ピリミジン塩基の修復開始に主役を演じている大腸菌endonuclease III (endo III)の哺乳類ホモローグのcDNAをマウスとヒトのcDNA librariesからcloningし,全塩基配列決定した。5.Endo IIIホモローグ,APEX nuclease,FEN-1,DNA polymerase,DNA ligase等精製酵素を用いて塩基除去修復系を再構築することを計画している。

在自由基引起的DNA损伤中，研究了每天经常或间接地进行每天经常发生的碱基缺乏位点（AP位点），并研究了涉及修复诸如胸腺素召回的生产损害的嘧啶基碱基，并研究了以下研究结果的酶。我们迄今已报告的Apex核酸酶是参与AP位点修复的主要哺乳动物酶。此外，从小鼠腹水肉瘤细胞中纯化了另外两种类型的AP核酸酶，30 kDa和39 kDa，并进行表征以确定部分氨基酸序列。我们试图为这些酶进行cDNA克隆，但尚未成功。 2。我们建议将flap Enstuncease（Fen-1; DNase IV）参与AP站点维修的下一步，以删除5'块。为了证实这一点，小鼠酶cDNA使用最近报道的核苷酸序列进行克隆，并在大肠杆菌中表达以获得重组Fen-1。 3。使用纯化的酶，例如Apex核酸酶和重组FEN-1来构建AP位点修复系统，这表明Apex核酸酶和Fen-1在修复AP位点中起着重要作用。 4。大肠杆菌内切核酸内切酶III（Endo III）的哺乳动物同源物的cDNA，该氏菌在启动受损的嘧啶基碱基中的主要作用，是从小鼠和人cDNA库中克隆的，在根本受损的DNA中，并进行了整个碱基。 5。我们计划使用纯化的酶，例如Endo III同源物，Apex核酸酶，FEN-1，DNA聚合酶和DNA连接酶来重建碱基切除修复系统。