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大腸菌エンドヌクレアーゼIIIの哺乳類ホモローグの遺伝子クローニングと性状解析

大肠杆菌内切酶 III 哺乳动物同源物的基因克隆和表征

基本信息

批准号：
09253236
负责人：
関周司
金额：
$ 1.34万
依托单位：
Okayama University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
1997
资助国家：
日本
起止时间：
1997 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

細胞のDNAは、物質代謝、環境化学物質、放射線等で生じたフリーラジカルでたえず損傷を受け、多様な損傷塩基を生じている。これらの損傷が正しく修復されないと突然変異、発がんにつながる。本研究は、フリーラジカルで損傷されたDNAに多く見られる損傷ピリミジン塩基の修復開始に主役を演じていると推定される大腸菌のエンドヌクレアーゼIIIの哺乳類ホモローグ(以下NTH1と略記)について研究することを目的とした。今年度の研究成果は以下のように要約できる。1.ヒト及びマウスNTH1のcDNAと遺伝子をクローニング(単離)し塩基配列を決め、DNAデータベースに登録した(登録番号:ヒトとマウスのcDNAはそれぞれAB001575、AB006812)。2.得られたcDNAを用い、エンドヌクレアーゼIIIを欠く大腸菌で組み換えタンパク質を発現し、これから精製した発現タンパク質(マウスのエンドヌクレアーゼIII同族体)の酵素学的性状を解析した。3.発現タンパク質はエンドヌクレアーゼIIIと同様に、チミングリコールDNAグリコシラーゼ活性、ウレアDNAグリコシラーゼ活性、APリアーゼ活性などを示した。4.NTH1は損傷ピリミジン塩基を除いたのちに3′側に一本鎖切断を入れるが、その結果生じた5′ブロックは我々がすでに報告しているAPEXのようなAPエンドヌクレアーゼで除かれて修復されると推定された。5.マウスとヒトのNTH1遺伝子をクローニングし、塩基配列を決めた(マウス遺伝子のデーターベース登録番号:AB009371)。ヒト、マウスともに、そのNTH1遺伝子は約6000塩基対で、6つのエキソンから構成されており、その上流に結節性硬化症に関係する遺伝子の一つTSC2遺伝子が5′-5′の配置できわめて近接して存在していることが明らかになった。今後、本酵素(異常)の遺伝情報維持機能や発がんとの関係を究明したい。

Cell DNA, substance metabolism, environmental chemicals, radiation, etc. are produced by various damage factors. The damage is repaired suddenly, and the damage is repaired suddenly. This study aimed to investigate the effects of DNA damage on the development of E. coli and its possible role in the initiation of DNA repair. This year's research results are as follows: 1. The cDNA sequence of NTH1 gene was determined by DNA sequencing (accession number: AB001575, AB006812). 2. The enzyme properties of E. coli were analyzed by using cDNA, protein and protein, and the enzyme properties of E. coli were analyzed by using cDNA. 3. The discovery of DNA fragmentation activity, DNA fragmentation activity, AP fragmentation activity, etc. 4. NTH1 is a natural lock on the 3′ side of the damage base, and the 5′ side of the damage base is reported to APEX. 5. NTH1 Genetics: AB009371; NTH1 Genetics: AB009371; NTH1 Genetics: AB009371; NTH1 Genetics: AB009371; The NTH1 gene is about 6000 bp, 6 bp and 6 bp. It is related to tuberous sclerosis. The TSC2 gene is 5′-5′. The NTH1 gene is close to the NTH1 gene. In the future, this enzyme (abnormal) gene information maintenance function and the relationship between them will be clarified.