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X線損傷DNAの修復開始に関与していると推定されるヒト細胞修復酵素の研究

研究推测参与 X 射线损伤 DNA 修复启动的人体细胞修复酶

基本信息

批准号：
03152088
负责人：
関周司
金额：
$ 3.26万
依托单位：
Okayama University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Cancer Research
财政年份：
1991
资助国家：
日本
起止时间：
1991 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

1.X線損傷等によって生じたDNAの一本鎖切断やapurinic/apyrimidinic(AP)sitesの修復開始に関与していると推定される修復酵素を、マウス腹水肉腫瘍細胞及びヒト培養細胞(HeLa細胞)から分離精製し、本酵素がAP endonuclease,3'ー5'exonuclese,DAS 3'repair diesterase,DNA3'ーphosphatase活性を示す分子量35、000の多機能DNA修復酵素(APEX nucleaseと命名)であることを明らかにした。2.マウス及びヒトの本酵素cDNAをcloningし、それらの塩基配列を決定し、タンパクの一次構造を推定した。その一次構造が当該酵素のものであることは、精製酵素から決定した部分アミノ酸配列と比較し確かめた。3.本酵素mRANは1.5kb一種類検出された。4.本cDNAのタンパクコ-ド領域をpUC18のlacZ promoterの下流に挿入して発現プラスミドを構築した。本プラスミドを大腸菌のBW2001株(ExoIII^-、EndoIV^-)及びBW9109株(ExoIII^-)細胞に導入し、形質転換細胞を得、本酵素活性を示すハイブリッドタンパクの発現を認めこれを精製した。またこの形質転換細胞は、AP sitesや3'プロック端DNA損傷を生じる薬剤methyl methaneーsulfonateやtertーbutyl hydroperoxide抵抗性で、発現タンパクがこれらDNA損傷修復に関与していることを示唆した。5.本APEX nucleaseは、酵素学的性状、生理機能、タンパクの一次構造等が大腸菌の主要なAP endonucleaseであるexonuclease IIIと類似しており、またStreptococcus pneumoniaeのexoAタンパクやDrosophilaのRrp1タンパクとも類似しており、これらと同族酵素と考えられた。6.今後は、(1)本酵素遺伝子(APX遺伝子)をcloningし、その構造解析、(2)染色体上の遺伝子座究明、(3)特異抗体作成、(4)生理機能の究明、(5)発がんや抗癌剤耐性獲得において本修復酵素の発現異常が関与する場合があるかどうかの検討等を行う予定で計画を進めている。

1.X-ray damage, etc., the repair of apurinic/apyrimidinic (AP) sites due to the cut of the DNA and the original lock begins It is a presumed repair enzyme of Kasukeki and Kasuke, a separation and purification of Masato ascites cells and HeLa cells (HeLa cells), and an enzyme AP. endonuclease,3'-5'exonuclese,DAS 3'repair diesterase,DNA3'-phosphatase activity is shown in the molecular weight of 35,000のmultifunctional DNA repair enzyme (APEX nucleaseとname)であることを明らかにした. 2. The enzyme cDNA cloning of the original enzyme and the enzyme cDNA, the determination of the base arrangement, and the estimation of the primary structure of the enzyme. The primary structure of the enzyme is determined by the determination of the enzyme and the purified enzyme, and the partial acid composition and comparison are confirmed. 3. This enzyme mRAN is a kind of 1.5kb 検出された. 4. This cDNA is inserted into the field of pUC18 lacZ promoter and is now constructed. This プラスミドを coli strain BW2001 (ExoIII^-, EndoIV^-) and BW9109 strain (ExoII I^-) Cell introduction, morphological transformation of cells, and activity of this enzyme are shown in the purification process.またこのmorphological change cellは、AP sitesや3'プロック terminal DNA damageを生じる薬剤methyl methaneーsulfonateやtertーbutyl Hydroperoxide resistance is related to DNA damage repair and DNA damage repair. 5. This APEX nuclease, enzymatic properties, physiological functions, primary structure of coliform, etc., AP endonuclease, exonuclease III, similar to Streptococcus Streptococcus pneumoniae exoA タンパクやDrosophila のRrp1 タンパクとも is similar to しており, これらと homogeneous enzyme と考えられた. 6. In the future, (1) analysis of the cloning structure of the enzyme DNA (APX DNA), (2) study of the DNA cloning site on the chromosome, (3) preparation of specific antibodies, (4) Research on physiological functions, (5) The discovery of repair enzymes that have acquired resistance to anti-cancer drugs Abnormal conditions and situations can be solved by waiting for the situation to be determined and planned.