X線損傷DNAの修復開始に関与していると推定されるヒト細胞修復酵素の研究

研究推测参与 X 射线损伤 DNA 修复启动的人体细胞修复酶

基本信息

  • 批准号:
    04152081
  • 负责人:
  • 金额:
    $ 1.28万
  • 依托单位:
  • 依托单位国家:
    日本
  • 项目类别:
    Grant-in-Aid for Cancer Research
  • 财政年份:
    1992
  • 资助国家:
    日本
  • 起止时间:
    1992 至 无数据
  • 项目状态:
    已结题

项目摘要

X線等放射線や活性酸素によって生じるDNAの一本鎖切断および多くの要因で生じるDNA塩基欠失部位(AP sites)の修復開始に関与すると推定される多機能DNA修復酵素(APEX nucleaseと命名;分子量35.4kDa)の性状を検討した。1.前年度クローニングしたヒト本酵素cDNAのタンパク質コード領域を挿入した発現プラスミドを構築し、これでexonuclease III(APEX nucleaseはこのexo IIIのホモローグ)欠損大腸菌株細胞を形質転換した。形成転換細胞は、親株細胞に比し、AP sitesを生じる薬剤および一本鎖切断を生じる薬剤に抵抗性を示し、本酵素が予想通りの生理活性を持つことを示した。2.本酵素一次構造のホモロジー比較から、核局在シグナルをもつ6kDaのN末領域とexo III等とホモロジーを示す29kDaのC末領域(活性ドメイン)から成ることが示唆された。本酵素精製の過程で、35kDa、33kDaおよび31kDaの活性な酵素断片が生じた。前2つの断片はsubtilisin様のプロテアーゼで、31kDaの断片は化学的機構でN末アミノ酸の一部が除かれて生じることが判明した。これらの結果は推定ドメイン構造を支持した。3.測定した全ての細胞に本酵素は存在しており、house keeping enzymeと考えられた。X線照射や薬剤処理でHeLa細胞に本酵素の誘導を試みたが、誘導されなかった。4.ヒトの白血球ゲノムライブラリーから本酵素遺伝子をクローニングし、塩基配列をきめた。本遺伝子は、2.64kbで5つのエキソンから構成されていた。5.今後、発がんと本酵素との関係を研究するためにはアンチセンスRNAの発現により本酵素量を低下させたり、本酵素遺伝子を破壊してみる必要があると考えられた。また、本酵素が関与するDNA修復系を一体として研究するため、本酵素の次のステップに関与する酵素dRpaseも研究する必要があるとの結論を得た。現在これらの研究を開始している。
X-rays and other radioactive substances produce DNA. The characteristics of APEX nucleases (molecular weight 35.4 kDa) are discussed. 1. In the past year, the enzyme cDNA has been cloned into the plasmid domain, and exonuclease III(APEX nucleotide) has been constructed. To form a new cell, the parent cell ratio, AP sites, the enzyme resistance, the enzyme resistance. 2. The primary structure of this enzyme is compared with that of exo III and exo III. The primary structure of this enzyme is compared with that of exo III and exo III. The primary structure of this enzyme is compared with that of exo III and exo III. During the purification process of this enzyme, 35kDa, 33kDa and 31kDa active enzyme fragments are produced. The first 2 fragments of subtilisin were identified as part of the chemical structure of the 31kDa fragment. The results of this study support the assumption that the structure of the plant is stable. 3. To determine the presence of this enzyme in all cells, house keeping enzyme and test. X-ray irradiation and treatment of HeLa cells induced the enzyme. 4. White blood cells must be prepared from the enzyme gene and the substrate. This gene is 2.64kb and consists of 5 parts. 5. In the future, we will study the relationship between the enzyme and the expression of RNA. The results show that the enzyme is related to the DNA repair system, and the enzyme is related to the DNA repair system. Now the research begins.

项目成果

期刊论文数量(3)
专著数量(0)
科研奖励数量(0)
会议论文数量(0)
专利数量(0)
Seki,Shuji: "Activity gel and activity blotting methods for detecting DNA-modifyin (repair) enzymes." J.Chromatogr.(1993)
Seki,Shuji:“用于检测 DNA 修饰(修复)酶的活性凝胶和活性印迹方法。”
  • DOI:
  • 发表时间:
  • 期刊:
  • 影响因子:
    0
  • 作者:
  • 通讯作者:
Seki,Shuji: "cDNA cloning,sequencing expression and possible domain structure of human APEX nuclease homologous to Escherichia coli exonuclease III." Biochim.Biophys.Acta. 1131(3). 287-299 (1992)
Seki,Shuji:“与大肠杆菌核酸外切酶 III 同源的人 APEX 核酸酶的 cDNA 克隆、测序表达和可能的结构域。”
  • DOI:
  • 发表时间:
  • 期刊:
  • 影响因子:
    0
  • 作者:
  • 通讯作者:
渡辺 晰子: "哺乳類細胞APエンドヌクレアーゼ多様性の一因" 生化学. 64(8). 836-836 (1992)
Akiko Watanabe:“促进哺乳动物细胞中 AP 核酸内切酶的多样性”,生物化学 64(8) (1992)。
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