大腸菌エンドヌクレアーゼIIIの哺乳類ホモローグの遺伝子クローニングと性状解析

大肠杆菌内切酶 III 哺乳动物同源物的基因克隆和表征

基本信息

批准号：
10151232
负责人：
関周司
金额：
$ 1.02万
依托单位：
Okayama University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas (A)
财政年份：
1998
资助国家：
日本
起止时间：
1998 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

細胞のDNAは、物質代謝、環境化学物質、放射線等で生じたフリーラジカルでたえず損傷を受け、多様な損傷塩基を生じている。これらの損傷が正しく修復されないと突然変異、発がんにつながる。本研究は、フリーラジカルで損傷されたDNAに多く見られる損傷ピリミジン塩基の修復開始に主役を演じている大腸菌のエンドヌクレアーゼIIIの哺乳類ホモローグ[遺伝子名:nth(cndonucleaseIII)-like1;シンボル、マウスmNthl1、ヒトhNTHL1:酵素名、NTHL1酵素と略記]について研究し、次の成果をえた。1. mNthl1とhNTHL1のcDNAと遺伝子をクローニングし、全塩基配列を決めた。2. 大腸菌で発現したNTHL1酵素を精製してその性状を解析した結果、本酵素が損傷DNAからチミングリコール、ウレア等の残基を除去するDNAグリコシラーゼ活性と塩基欠落部位(APサイト)の3'側に切れ目を入れるAPリアーゼ活性を備えた二価性酵素であることを明らかにした。3. APリアーゼ活性には、NTHL1酵素の212番目のリジン残基が必須で、酵素基質中間体形成に関与することを明らかにした。4. マウスおよびヒトの本遺伝子はともに、その上流に5'-to-5'配置で結節性硬化症2の遺伝子(TSC2)が近接して存在し、NTHL1とTSC2両遺伝子のプロモーターは重なり合っていると推定された。5. 5'RACEの結果から、NTHL1とTSC2両遺伝子はともに転写開始点が複数個あると推定された。6. 両遺伝子とも調べた全ての臓器で発現しており、housekeeping genesと考えられた。7. NTHL1遺伝子の下流には、3'-to-3'の配置でNa^+/H^+交換輸送体調節因子の遺伝子(SLC9A3R2と命名)が存在した。8. 本実験結果にこれまでの報告を参考にすると、ヒトではこれらの遺伝子は染色体16p13.3の位置に、セントロメア側からTSC2、NTHL1、SLC9A3R2の順に配置していると考えられた。9. 得られた成果は、当該修復機構の研究のみならず、隣接遺伝子機能の解析にも、結節性硬化症の多様な病態の解明にも重要と考えられる。

细胞DNA不断受到物质代谢，环境化学物质，辐射等产生的自由基的损害，从而导致各种受损的碱基。如果这些损害赔偿未正确修复，则可能导致突变和癌变。 This study investigated the mammalian homologue of E. coli endonuclease III (gene name: nth(cndonuclease III)-like1; symbol, mouse mNthl1, human hNTHL1: enzyme name, abbreviated as NTHL1 enzyme) of Escherichia coli endonuclease III, which plays the leading role in the initiation of repair of damaged嘧啶碱通常在自由损坏的DNA中发现，并获得了以下结果。 1。MNTHL1和HNTHL1的cDNA和基因被克隆，并确定整个碱基序列。 2。在大肠杆菌中表达的NTHL1酶的纯化及其特性的分析表明，该酶是一种具有DNA糖基化酶活性的二价酶，可去除胸膜召回和尿素等残基DNA和AP裂解酶的活性等残基，并切除了基本depletion eTpletion位置的3'侧面（AP APET）。 3。我们已经揭示了NTHL1酶位置212处的赖氨酸残基对于AP石酶活性至关重要，并且参与了酶底物中间体的形成。 4。发现小鼠和人类基因都接近在5'-至5'上游构型中结节硬化症2（TSC2）的基因，NTHL1和TSC2基因的启动子均重叠。 5。从5'race的结果中，据估计NTHL1和TSC2基因都有多个转录起源。 6。这两个基因均在所有检查的器官中表达，并被视为管家基因。 7。nTHL1基因的下游是3'-to-3'配置中的Na^+/h^+交换转运蛋白调节子基因（名为SLC9A3R2）。 8。根据该实验的先前报道，人们认为，在人类中，这些基因以TSC2，NTHL1和SLC9A3R2的顺序放置在16p13.3染色体上。 9。所获得的结果不仅对研究修复机制，而且对于分析相邻基因功能以及阐明结核性硬化的多种病理而言很重要。