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フリーラジカル損傷DNAの修復に関与する酵素の研究

参与修复自由基损伤 DNA 的酶的研究

基本信息

批准号：
08264223
负责人：
関周司
金额：
$ 0.83万
依托单位：
Okayama University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
1996
资助国家：
日本
起止时间：
1996 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-08264223/
关键词：
DNA修復酵素 AP endonuclease APEX FEN-1 Endonuclease III homolog 塩基除去修復 cDNA cloning フリーラジカル

项目摘要

フリーラジカルによるDNA損傷の中で,直接または間接に毎日多数生じている塩基欠落部位(APサイト)の修復に関与する酵素及びチミングリコールのようなラジカル損傷ピリミジン塩基の修復に関与する酵素について研究し,以下のような研究成果を得た。APサイトの5′側に切れ目を入れAPサイトの修復開始に関与する哺乳類酵素の主体は,これまで報告してきたAPEX nucleaseであったが,この他に30kDaと39kDaの二種のAP endonucleasesの存在を見出しこれらをマウス腹水肉腫細胞から精製し,性状解析を行い,部分アミノ酸配列を決定した。これら酵素のcDNA cloningを試みているが未だ成功していない。2.APサイト修復においてAPEXの次のステップにflap endounclease (FEN-1 ; DNase IV)が関与して5′ブロックを除くことを示唆した。このことを確かめるために,最近報告された塩基配列を利用してマウスの本酵素cDNAをcloningし,大腸菌で発現してrecombinant FEN-1を得た。3.APEX nuclease,recombinant FEN-1等の精製酵素で,APサイト修復系を構築し,APEX nuclease,FEN-1等がAPサイトの修復に重要な役割を演じていることを示唆した。4.ラジカル損傷DNAに多く見られる損傷ピリミジン塩基の修復開始に主役を演じている大腸菌endonuclease III (endo III)の哺乳類ホモローグのcDNAをマウスとヒトのcDNA librariesからcloningし,全塩基配列決定した。5.Endo IIIホモローグ,APEX nuclease,FEN-1,DNA polymerase,DNA ligase等精製酵素を用いて塩基除去修復系を再構築することを計画している。

In the process of DNA damage, direct and indirect research on enzymes and enzymes related to the repair of most of the DNA damage sites (AP sites) was carried out. The following research results were obtained. The main body of mammalian enzyme is related to the initiation of AP enzyme repair, and the existence of two kinds of AP endonucleases of 30kDa and 39kDa is detected. The cDNA cloning of these enzymes was not successful. 2. APEX's secondary flap endounclease (FEN-1 ; DNase IV) is related to APEX's secondary flap endounclease (FEN-1 ; DNase IV). Recently, recombinant FEN-1 has been identified in E. coli using cDNA cloning of the enzyme. 3. APEX nuclease,recombinant FEN-1 and other refined enzymes are important for the construction of AP repair system. 4. DNA damage caused by DNA damage is often observed. DNA damage caused by DNA damage is mainly caused by the initiation of repair of E. coli endonuclease III (endo III) and mammalian DNA damage caused by cDNA libraries. 5. Endo III,APEX nucleotide,FEN-1,DNA polymerase,DNA ligase and other purification enzymes are used to reconstruct the repair system.