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受容体チロシンキナーゼのポリユビキチン化を触媒する酵素群の同定とその機能解析

受体酪氨酸激酶多泛素化催化酶的鉴定及其功能分析

基本信息

批准号：
08278203
负责人：
森聖二郎
金额：
$ 1.79万
依托单位：
Chiba University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
1996
资助国家：
日本
起止时间：
1996 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

我々は、血小板由来増殖因子(PDGF)受容体をはじめとする殆どの受容体チロシンキナーゼが、リガンド刺激依存性にポリユビキチン化すること、およびポリユビキチン化した受容体は、細胞内で26Sプロテアソームによって速やかに分解されることを発見した。そして、このリガンド依存性ポリユビキチン化とそれに引き続くプロテアソームによる活性化した受容体の分解という現象は、全く新しいタイプの受容体チロシンキナーゼの細胞内シグナル伝達抑制機序の一つであることを報告してきた。本研究は、以上のような我々自身の研究成果を踏まえ、受容体チロシンキナーゼのユビキチン化の分子機構を明らかにし、その人為的制御を通して、種々の生命現象ならびに病態における受容体のユビキチン化の機能的意義を解明することを企図したものである。平成8年度の研究では、ウサギ網状赤血球溶解液中に存在するEGF受容体のイソビトロでのユビキチン化を促進する酵素活性を担う蛋白質の精製を種々のクロマトグラフィーを用いて行なった。粗精製された蛋白質は、リコンビナントのE1(ユビキチン活性化酵素)およびUBC4(ユビキチン結合酵素)の両者の存在下で、自己リン酸化した受容体にユビキチン分子を共有結合させる活性を有していることが判明し、おそらく未知のユビキチンリガーゼ(E3)の一種であると考えられた。既に知られている蛋白質のアミノ末端を認識するE3と異なり、一連の膜蛋白質を認識する機能を有するものと思われる。今後はこの蛋白質のさらなる精製を試み、高度に精製された蛋白質の部分アミノ酸配列をもとに、オリゴヌクレオチドプローベを作製し、cDNAライブラリーのスクリーニングを行ない、これらプローベと特異的に結合する細胞内蛋白質のcDNAを同定する予定である。

The receptor of platelet-derived growth factor (PDGF) is a receptor that is sensitive to stimuli and is sensitive to intracellular 26S. This paper reports on the phenomenon of receptor decomposition and activation in response to a completely new receptor response response to an intracellular response inhibition mechanism in response to a completely new response. This study is based on our own research results, to clarify the molecular mechanism of receptor interaction, to clarify the artificial control of biological phenomena, and to clarify the significance of receptor interaction. In the study conducted in 2008, the EGF receptor was present in reticulocyte lysate, and the enzyme activity was promoted to improve protein purification. In the presence of E1 and UBC4, the crude protein was purified and acidified. We know that the protein has a terminal function, and we know that the protein has a terminal function. In the future, we will try to refine the protein, highly refine the protein, and partially modify the acid sequence. We will control the protein sequence, cDNA sequence, and specific binding. We will determine the cDNA sequence of intracellular protein.