哺乳類細胞のDNA修復とアポトーシスの経路選択機構

哺乳动物细胞DNA修复和凋亡的途径选择机制

• 批准号: 08280223
• 负责人: 田沼 靖一
• 金额: $ 1.34万
• 依托单位: Tokyo University of Science
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
• 财政年份: 1996
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1996 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-08280223/
• 关键词: DNA修復; アポトーシス; DNaseγ; ポリ(ADP-リボシル)化

アポトーシスは現在のところ、細胞の縮小、クロマチンの核膜周辺への凝縮、核の断片化、微絨毛の消失などの形態学的変化、及び生化学的変化であるDNAの断片化によって定義されている。しかし、アポトーシスの定義の一つともなっているDNAのヌクレオソーム単位での断片化を司るエンドヌクレアーゼの実体は不明のままであった。我々は実行過程の中心的酵素であるDNAの断片化を司るエンドヌクレアーゼに着目して研究を行い、その実体を同定することに成功し、これをDNaseγと命名した。DNaseγは中性領域に至適pHをもつCa^<2+>/Mg^<2+>-要求性でZn^<2+>によって阻害される酵素である。さらにDNA切断様式は3'-OH/5'-P型であり、細胞レベルにおけるアポトーシスのDNA断片化の様式と一致することを見出した。さらに我々はDNaseγの部分アミノ酸配列を決定するため、ラット脾臓よりDNaseγの大量精製を行い、N末端及びいくつかの内部アミノ酸配列を気相アミノ酸シークエンサーを用いて決定した。ホモロジー検索の結果、DNaseγは新規の酵素であった。次にこれらのアミノ酸配列から予想される塩基配列をもとにDNAオリゴヌクレオチドプローブを作製し、λgt11ラット脾臓cDNAライブラリーを用いてスクリーニングを行いDNaseγ遺伝子をコードするクローンを単離することに成功した。また、DNaseγcDNAの解析から、本酵素は前駆体から成熟型への変換が起こることが明らかとなった。

The definition of DNA fragmentation is based on the following aspects: current state, cell shrinkage, condensation of nuclear envelope, nuclear fragmentation, disappearance of microvilli, morphological and biochemical changes. The definition of DNA fragmentation is unclear. The enzyme at the center of the process is called DNA fragmentation. DNase γ is neutral domain, pH appropriate, Ca ^<2 +>/Mg ^<2 +>-demanding, Zn ^<2 +>, and enzyme resistant. The DNA fragmentation pattern is consistent with the 3'-OH/5'-P pattern. In addition, we determine the partial acid alignment of DNase γ, and determine the amount of purification of DNase γ in the middle, N terminal, and internal acid alignment of DNase γ.ホモロジー検索の结果、DNaseγは新规の酵素であった。In the second place, the DNA sequence was successfully controlled by DNA sequencing, and the DNA sequence was successfully controlled by DNA sequencing. DNA analysis of DNase γ gene, the enzyme from the precursor to mature type of DNA transformation

项目成果

田沼靖一: "アポトーシスとは何か-死からはじまる生の科学-" 講談社, 239 (1996)

田沼精一：“什么是细胞凋亡？从死亡开始的生命科学，239 (1996)”

Sei-ichi Tanuma: "DNA fragment'ation during thymic apoptosis is catalyzed by DNaseγ." Apoptosis. 1. 147-152 (1996)

Sei-ichi Tanuma：“胸腺细胞凋亡过程中的 DNA 片段化是由 DNaseγ 催化的。” 1. 147-152 (1996)。

田沼靖一: "アポトーシスと創薬" ファルマシア, 140 (1996)

Seiichi Tanuma：“细胞凋亡和药物发现”Pharmacia，140（1996）

Sei-ichi Tanuma: "Molecular mechanisms of apoptosis." Apoptosis in Normal Development and Cancer (ed.by Mels Sluyser). Taylor & Francis. 39-59 (1996)

Sei-ichi Tanuma：“细胞凋亡的分子机制。”

Sei-ichi Tanuma: "Inhibitory effect of tannic acid on human immunodeficiency virus promoter activity induced by 12-0-tetradecanoylphorbol-13-acetate in Jurkat T-cells." Biochem.Biophys.Res.Commun.220. 411-417 (1996)

Sei-ichi Tanuma：“单宁酸对 Jurkat T 细胞中 12-0-tetradecanoylphorbol-13-acetate 诱导的人类免疫缺陷病毒启动子活性的抑制作用。”