アポトーシス、DNaseγを指標としたがん診断法の開発

开发以细胞凋亡和DNaseγ为指标的癌症诊断方法

• 批准号: 12217140
• 负责人: 田沼 靖一
• 金额: $ 2.62万
• 依托单位: Tokyo University of Science
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas (C)
• 财政年份: 2000
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2000 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-12217140/
• 关键词: DNaseγ; モノクローナル抗体; X線; 胸腺細胞; アポトーシス

本研究の準備としてDNaseγを特異的に認識するモノクローナル抗体、hg302及びhg303の作製を行った。本研究ではまず、これら二種のモノクローナル抗体の特性について詳細に検討を行った。hg303はウエスタンブロットにおいてヒトDNaseγを特異的に検出し、hg302は免疫沈降、免疫組織染色においてヒト、ラット、及びマウスDNaseγを認識した。いずれの抗体においても、他のDNase Iファミリーエンドヌクレアーゼとの交差反応は観察されなかった。hg302を用いX線照射によりアポトーシスを誘発したラット胸腺細胞におけるDNaseγの局在を調べたところ、興味深いことに生細胞においてシグナルは検出されず、アポトーシス細胞の核が強く染色された。すなわち、hg302はアポトーシス細胞の核に存在するDNaseγを特異的に認識することが明らかとなった。HaLa S3細胞にDNaseγを強制発現した系においても同様の結果が得られた。以上2つの系において、アポトーシス誘発前後におけるDNaseγのタンパクレベルはほぼ一定であることから、hg302は免疫染色においてアポトーシス細胞の核に局在する活性化DNaseγを特異的に認識することが示された。現在、hg302がなぜ活性化DNaseγのみを認識するのかは不明であるが、生細胞においてDNaseγと相互作用し、hg302のエピトープをマスクしているような因子の存在が一つの可能性として考えられる。今回作製されたDNaseγ特異的モノクローナル抗体は、DNaseγを特異的に検出するELISA系、及びウエスタンブロット系を構築するにあたり十分な特異性を有していることが明らかとなった。今後、卵巣癌、子宮癌等の婦人科領域の癌細胞におけるDNaseγの発現の有無を調べ、さらには抗癌剤作用機序、及び癌の悪性度診断等への応用に向けた基礎実験を行う予定である。

This study prepared for the recognition of DNaseγ-specific antibodies, hg302 and hg303. In this study, the characteristics of two kinds of antibodies were discussed in detail. hg303 is the most sensitive to DNase γ, hg302 is the most sensitive to DNaseγ, and hg303 is the most sensitive to DNaseγ, and hg302 is the most sensitive to DNaseγ. In the middle of the day, the antibody is detected by the enzyme I. hg302 is irradiated with X-rays to induce thymocytes to express DNaseγ in thymocytes. Hg302 is the first to recognize the presence of DNaseγ in the nucleus of a cell. HaLa S3 cell DNaseγ stress occurs in the same way as the result. The above 2 types of DNase γ were identified before and after induction by immunostaining and hg302 immunostaining in the presence of activated DNaseγ in the nucleus of cells. Now, hg302 has been recognized as an active DNaseγ, and the possibility of the existence of a DNaseγ interacting with hg302 in living cells has been examined. Now we have a DNaseγ-specific ELISA system and a DNaseγ-specific ELISA system. In the future, the development of DNaseγ in cancer cells in female medical fields such as ovarian cancer and uterine cancer will be regulated, and the mechanism of action of anticancer agents and the diagnosis of cancer will be determined.

项目成果

Sei-ichi Tanuma: "Characterization of two DNase γ-specific monoclonal antibodies and the in situ detection of DNase γ in the nuclei of apoptotic rat thymocytes."Biochem.Biophys.Res.Commun.. 275. 343-349 (2000)

Sei-ichi Tanuma：“两种 DNase γ 特异性单克隆抗体的表征以及凋亡大鼠胸腺细胞核中 DNase γ 的原位检测。”Biochem.Biophys.Res.Commun. 275. 343-349 (2000)

Sei-ichi Tanuma: "Biological implications of apoptosis/apobiosis in senescence and life-span"Nagoya Med.J.. 43. 73-80 (2000)

Sei-ichi Tanuma：“细胞凋亡/凋亡对衰老和寿命的生物学意义”Nagoya Med.J.. 43. 73-80 (2000)

Sei-ichi Tanuma: "Characterization of human DNase I family endonucleases snd activation of DNase γ during apoptosis."Biochemistry.. 40. 143-152 (2000)

Sei-ichi Tanuma：“人类 DNase I 家族核酸内切酶的表征以及细胞凋亡过程中 DNase γ 的激活。”Biochemistry.. 40. 143-152 (2000)

Sei-ichi Tanuma: "Design of an Apoptosis-Inducing short peptide using the system for macromolecular interaction assessment MIAX."Cenome Informatics. 11. 432-433 (2000)

Sei-ichi Tanuma：“使用用于大分子相互作用评估 MIAX 的系统设计凋亡诱导短肽。”Cenome Informatics。