アポトーシス・DNaseγを標的としたがん診断法の開発

开发针对细胞凋亡/DNaseγ的癌症诊断方法

• 批准号: 13218125
• 负责人: 田沼 靖一
• 金额: $ 2.3万
• 依托单位: Tokyo University of Science
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas (C)
• 财政年份: 2001
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2001 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-13218125/
• 关键词: DNase γ; モノクローナル抗体; 制癌剤; ヒト卵巣癌細胞; アポトーシス

本研究においてDNase γを特異的に認識するモノクローナル抗体、hg302及びhg303の作製を行った。hg302は免疫沈降、免疫組織染色においてヒト、ラット、及びマウスDNase γを認識する特性を有していた。各種制癌剤によりアポトーシスを誘発したL929細胞におけるDNase γの局在をhg302を用いて調べたところ、興味深いことに生細胞においてシグナルは検出されず、アポトーシスを起こした細胞の核が染色された。すなわち、hg302はアポトーシス細胞の核に存在するDNase γを特異的に認識することが明らかとなった。ヒト卵巣癌培養細胞株NOS4細胞にDNase γを強制発現した系においても同様の結果が得られた。これらの結果から、アポトーシス誘発前後におけるDNase γのタンパクレベルはほぼ一定であることを考えあわせると、hg302は免疫染色においてアポトーシス細胞の核に局在する活性化DNase γを特異的に認識することが示唆される。一方、hg303はウエスタンブロットにおいてヒトDNase γを特異的に検出した。いずれの抗体においても、他のDNase Iファミリーエンドヌクレアーゼとの交差反応は観察されなかった。今回作製された二種のDNase γ特異的モノクローナル抗体は、DNase γを特異的に検出するELISA系を構築するにあたり十分な特異性を有していることが判明した。今後、種々の癌細胞におけるDNase γの発現の有無を調べ、それと抗癌剤に対する感受性の差異との相関性について詳細に解析することから、癌の悪性度診断等への応用が期待される。

This study に お い て DNase gamma を specific に know す る モ ノ ク ロ ー ナ ル antibodies, hg302 and び hg303 の cropping を line っ た. Hg302 は immune sink, immunohistochemical staining に お い て ヒ ト, ラ ッ ト and び マ ウ ス DNase gamma を know す る features を have し て い た. Various cancer tonic に よ り ア ポ ト ー シ ス を 発 lure し た L929 cell に お け る DNase gamma の bureau in を hg302 を with い て adjustable べ た と こ ろ, deep interest い こ と に living cells に お い て シ グ ナ ル は 検 out さ れ ず, ア ポ ト ー シ ス を up こ し の た cell nuclear が dyeing さ れ た. す な わ ち, hg302 は ア ポ ト ー シ の ス cell nucleus に す る DNase gamma を specific に know す る こ と が Ming ら か と な っ た. Youdaoplaceholder0 The cultured cell line NOS4 of the egg nest cancer にDNase γを forced the appearance of the <s:1> た line にお て て て ヒト the similar <s:1> result が was られた. こ れ ら の results か ら, ア ポ ト ー シ ス 発 lure before and after に お け る DNase gamma の タ ン パ ク レ ベ ル は ほ ぼ certain で あ る こ と を exam え あ わ せ る と, hg302 は immune dyeing に お い て ア ポ ト ー シ の ス cell nuclear に bureau in す る activeness DNase gamma を specific に know す る こ と が in stopping さ れ る. One party, hg303 ウエスタ ウエスタ ブロットにお てヒト てヒト てヒトDNase γを specific に検 output た た. い ず れ の antibody に お い て も, he の DNase I フ ァ ミ リ ー エ ン ド ヌ ク レ ア ー ゼ と の job against 応 は 観 examine さ れ な か っ た. This time making さ れ た two の DNase gamma specific モ ノ ク ロ ー ナ は, DNase gamma を ル antibody specific に 検 out す る ELISA is を build す る に あ た り very な specificity を have し て い る こ と が.at し た. In the future, the kind of 々 の cancer に お け る DNase gamma の 発 is の を adjustable べ, そ れ と anti-cancer tonic に す seaborne る susceptibility difference の と の phase masato sex に つ い て detailed analytical す に る こ と か ら, cancer の 悪 degree diagnosis such as へ の 応 with が expect さ れ る.

项目成果

Sei-ichi Tanuma: "Seaweed prevents breast cancer?"Jpn. J. Cancer Res.. 92. 483-487 (2001)

Sei-ichi Tanuma：“海藻可以预防乳腺癌？”Jpn.

Sei-ichi Tanuma: "Activation of caspase-8 is critical for sensitivity to cytotoxic anti-Fas antibody-induced apoptosis in human ovarian cancer cells"Apoptosis. 7. 107-113 (2002)

Sei-ichi Tanuma：“caspase-8 的激活对于细胞毒性抗 Fas 抗体诱导的人卵巢癌细胞凋亡的敏感性至关重要”。

Sei-ichi Tanuma: "Isolation and characterization of the DLAD/Dlad genes,which lie head-to-head with the genes for urate oxidase"Biochem.Biophys.Res.Commun.. (in press). (2002)

Sei-ichi Tanuma：“DLAD/Dlad 基因的分离和表征，该基因与尿酸氧化酶基因正面交锋”Biochem.Biophys.Res.Commun..（出版中）。

Sei-ichi Tanuma: "DNA fragmentation in ischemic core and penumbra in focal cerebral ischemia in rats"Mol. Brain Res.. 91. 112-118 (2001)

Sei-ichi Tanuma：“大鼠局灶性脑缺血中缺血核心和半暗带的 DNA 碎片”Mol。

Sei-ichi Tanuma: "Characterization of human DNase I family endonucleases and activation of DNaseγ during apoptosis"Biochemistry. 40. 143-152 (2001)

Sei-ichi Tanuma：“人类 DNase I 家族核酸内切酶的表征和细胞凋亡期间 DNaseγ 的激活”生物化学，40. 143-152 (2001)。