アポトーシスを司るエンドヌクレアーゼの構造と機能

控制细胞凋亡的核酸内切酶的结构和功能

• 批准号: 07273267
• 负责人: 田沼 靖一
• 金额: $ 1.22万
• 依托单位: Tokyo University of Science
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
• 财政年份: 1995
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1995 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-07273267/
• 关键词: アポトーシス; エンドヌクレアーゼ; DNA断片化; 細胞死; ネクローシス

アポトーシスの特徴であるDNAの断片化を司るエンドヌクレアーゼに焦点を絞り、その実体の同定とcDNAクローニングを行うことによって、その構造と機能を解明することを目的とした。X線照射によってアポトーシスを誘発させたラット胸腺細胞の核からアポトーシスを司るエンドヌクレアーゼを完全精製し、その性状を詳細に解析した。その結果、新規な核型エンドヌクレアーゼであることが判明し、DNaseγと名付けた。本酵素は、分子量33kDaのCa^<2+>/Mg^<2+>-依存性の中性エンドヌクレアーゼであることが判明した。DNaseγの精製標品をリシルエンドペプチダーゼ、又はアスパルティックエンドペプチダーゼで処理し、得られたペプチドをHPLCにより分取し、気相アミノ酸シークエンサーによってそれらの部分アミノ酸配列を決定した。これらの部分アミノ酸配列を基にプローブを作製し、ラット胸腺cDNAライブラリーよりクローニングを行ない、その全塩基配列を決定した。このcDNAより予想されるアミノ酸配列から、DNaseγはN末端にプリカーサーペプチドを有することがわかった。また興味深いことに、このプリカーサー領域にはロイシンジッパーが存在していた。一方、C末端には核移行シグナルがあり、内部にDNaseIと類似した酵素活性中心があることが明らかとなった。

ア ポ ト ー シ ス の, 徴 で あ る の DNA fragment the を department る エ ン ド ヌ ク レ ア ー ゼ に focus stranded を り, そ の の be body with constant と cDNA ク ロ ー ニ ン グ を line う こ と に よ っ て, そ の function of tectonic と を interpret す る こ と を purpose と し た. X-ray irradiation に よ っ て ア ポ ト ー シ ス を 発 lure さ せ た ラ ッ ト thymocyte の nuclear か ら ア ポ ト ー シ ス を department る エ ン ド ヌ ク レ ア ー ゼ を fully refined し, そ の traits を detailed analytical し に た. そ の results, new rules な karyotype エ ン ド ヌ ク レ ア ー ゼ で あ る こ と が.at し, DNase gamma と pay け た. This enzyme は, molecular weight 33 kda の Ca ^ 2 + > < / Mg ^ 2 + > < - dependency の neutral エ ン ド ヌ ク レ ア ー ゼ で あ る こ と が.at し た. DNase gamma の refined standard product を リ シ ル エ ン ド ペ プ チ ダ ー ゼ and は ア ス パ ル テ ィ ッ ク エ ン ド ペ プ チ ダ ー ゼ で 処 し, happily ら れ た ペ プ チ ド を HPLC に よ り divide し, 気 ア ミ ノ acid シ ー ク エ ン サ ー に よ っ て そ れ ら の part ア ミ ノ acid with column を decided し た. こ れ ら の part ア ミ ノ acid with column を base に プ ロ ー ブ を as し, ラ ッ ト thymus cDNA ラ イ ブ ラ リ ー よ り ク ロ ー ニ ン グ を line な い, そ の salt base full column を decided し た. こ の cDNA よ り to think さ れ る ア ミ ノ acid with column か ら, DNase gamma は N terminal に プ リ カ ー サ ー ペ プ チ ド を have す る こ と が わ か っ た. Interests deep い ま た こ と に, こ の プ リ カ ー サ ー field に は ロ イ シ ン ジ ッ パ ー が exist し て い た. A, C terminal に は nuclear migration シ グ ナ ル が あ り, internal に DNaseI と similar し た enzyme active center が あ る こ と が Ming ら か と な っ た.

项目成果

Sei-ichi Tanuma: "An endonuclease responsible for apoptosis." Aopotosis: Prog. Mol. Subcell. Biol.32. 1-12 (1995)

Sei-ichi Tanuma：“一种负责细胞凋亡的核酸内切酶。”

Sei-ichi Tanuma: "Molecular mechanisms of apoptosis." Sut. Bull.12. 36-43 (1995)

Sei-ichi Tanuma：“细胞凋亡的分子机制。”

Sei-ichi Tanuma: "A Macrocircular ellagitannin, oenothein B, supresses mouse mammary tumor gene expression via inhibition of poly(ADP-ribose)glycohydrolase." Biochem. Biophys. Res. Commun.210. 329-337 (1995)

Sei-ichi Tanuma：“大环鞣花单宁（月见草素 B）通过抑制聚（ADP-核糖）糖水解酶来抑制小鼠乳腺肿瘤基因表达。”

田沼靖一: "アポトーシス -機能と機構-" 日経サイエンス社, 213 (1995)

Seiichi Tanuma：“细胞凋亡-功能和机制-”《日经科学》，213（1995）

Sei-ichi Tanuma: "Induction of autoantibodies in normal mice by injection of nucleobindin and natural occurrence of antibodies against nucleobindin in autoimmune MRL/lpr/lpr mice." Immunol. Lett.45. 35-42 (1995)

Sei-ichi Tanuma：“通过注射核结合素在正常小鼠中诱导自身抗体，并在自身免疫 MRL/lpr/lpr 小鼠中自然产生针对核结合素的抗体。”