パルスデザインによる蛋白質分子内部運動の解析

使用脉冲设计分析蛋白质分子的内部运动

• 批准号: 09261212
• 负责人: 桑田 一夫
• 金额: $ 1.28万
• 依托单位: Gifu University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
• 财政年份: 1997
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1997 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-09261212/
• 关键词: βラクトグロブリン; 多次元・多核NMR; TFE; 二次構造; ダイナミクス; α→β転移; オフ・レゾナンス; スピン・ロック

酵母で発現したウシβラクトグロブリンA(BLG)の主鎖の原子核を、種々の溶媒条件下で、多次元・多核NMRを用いて帰属し、同時に、主鎖のダイナミクスを調べた。天然状態の溶液中における二次構造は、X線解析の結果とかなり一致していたが、βシートの端が合わない部分が多数認められた。全体として、後半のβシート群が、疎水性のコアを形成しているという考えを支持する結果が得られた。BLGはトリフルオロエタノール(TFE)中でヘリックス構造をとることが知られているが、ヘリックス構造が安定となるTEF50%中において、主鎖の原子を多次元・多核NMRを用いて帰属し、同時に、主鎖のダイナミクスを調べた。得られた二次構造では、約52%のαヘリックスが含まれていた。BLGのα→β転移の中点に当たるTEF15%中で、種々の温度下で、2次元HSQCスペクトルを測定した。この結果、BLGの水溶液中における天然立体構造形成過程においても、後半(β_E〜β_H)部分が先に疎水的なコアを形成するが、前半部分(β_A〜β_D)は局所的相互作用が優勢で、ヘリックスのまま、一時的に留まっていると考えられた。パルス・デザインにおいては、α→β転移のような、ゆっくりした構造揺らぎの周波数を、全ての原子において明らかにするため、多次元・多核NMRにおける、オフ・レゾナンス・スピン・ロックを行うためのパルス系列を複数開発した。これにより、原子の運動を、kMzオーダー周波数として、観測出来るようになると考えられる。現在、TFE15%中のBLGを用い、観測を行っている。

Yeast was used to detect β-phenylethyltransferase A (BLG) in nuclei, in various solvents, in multiplex and polynuclear NMR, at the same time, and in the same time. In the natural state solution, the results of secondary production and X-ray analysis showed that the results were consistent with each other, and most of the samples were found to be in good agreement with each other. The whole group, the second half of the beta group, and the water-based group were tested in support of the results. In the BLG system, multi-core NMR system (TFE) is used to detect the number of nodes in the TEF50%, the key atom is multi-core, and the host is multi-core. In the same time, the host is in the same time. It is necessary to make a second trial, which is about 52% of the total cost. The mid-point of BLG α-β shift should be measured at different temperatures in TEF15%, 2-dimensional HSQC temperature. The results showed that the process of the formation of the natural stereotaxic compound in BLG aqueous solution, the formation of the second half (β _ E ~ β _ H), the first half (β _ A ~ β _ D), the interaction of the first half (β _ A ~ β _ D), the first half (β _ A ~ β _ D). The number of cycles, the number of cycles. The number of cycles is measured by kMz, atomic motion, atomic motion, and so on. At present, BLG is used in TFE15%, and you can use it in a variety of ways.

项目成果

Kazuo Kuwata: "Rotational correlation times of internuclear vestors in a DNA duplex with G-A mismatch determined in aqueous solution by complate relaxation matrix analysis of off-resonance ROESY (O-ROESY)spectra" J.Magn.Reson.128・1. 70-81 (1997)

Kazuo Kuwata：“通过非共振 ROESY (O-ROESY) 谱的计算机弛豫矩阵分析，在水溶液中确定具有 G-A 错配的 DNA 双链体中核间维斯特的旋转相关时间”J.Magn.Reson.128・1。 81 (1997)

Kazuo Kuwata: "Alteration of redox state of human serum albumin in patients under anesthesia and invasive surgery" J.Chromatogr.B. 698. 27-33 (1997)

Kazuo Kuwata：“麻醉和侵入性手术患者中人血清白蛋白氧化还原状态的改变”J.Chromatogr.B。

桑田一夫: "タンパク質のかたちと物性" 共立出版, 234 (1997)

桑田一夫：“蛋白质的形状和物理性质”Kyoritsu Shuppan，234（1997）

Kazuo Kuwata: "Cross-relaxation times of normal and biochemically induced osteoarthritic rabbit knee cartilages" Jpn.J.of Physiol.47・3. 291-297 (1997)

Kazuo Kuwata：“正常和生化诱导的骨关节炎兔膝软骨的交叉松弛时间”Jpn.J.of Physiol.47・3（1997）。

Kazuo Kuwata: "High level expression of bovine β-Lactoglobulin in Pichia pastoris and characterization of its physical properties" Prot.Eng.in press.

Kazuo Kuwata：“牛 β-乳球蛋白在毕赤酵母中的高水平表达及其物理特性的表征”Prot.Eng.in press。