ヘルペスウイルスRNAの核外輸送制御機構の解明

阐明疱疹病毒RNA的核输出控制机制

基本信息

批准号：
19041027
负责人：
萩原正敏
金额：
$ 4.8万
依托单位：
Tokyo Medical and Dental University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
2007
资助国家：
日本
起止时间：
2007 至 2008
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-19041027/
关键词：
単純ヘルペスウイルス PML ICP27 選択的スプライシング

项目摘要

単純ヘルペスウイルス2型(HSV-2 ; Herpes Simplex Virus type-2) は世界中に広く伝播しているDNAウイルスで、性器ヘルペスを主症状とする。HSV-2のウイルスゲノム複製は宿主細胞の核内で行われるが、HSV-2ゲノムは宿主染色体には組み込まれず、リング状となり、PML(promyelocytic leukemia protein, TRIM19)を主成分とするドット状の核内構造体ND10(PML body, POD) に取り込まれる。PMLのpre-mRNAは選択的スプライシングを受け7種のPMLアイソフォーム蛋白が産生される。我々はHSV-2感染によって、PNL pre-mRNAの選択的スプライシングが影響を受け、PML蛋白質のアイソフォームが変化することを見出した。すなわち、非感染状態の細胞ではI型とII型PMLが主に発現しているが、HSV-2感染細胞ではV型が主に発現する。この選択的スプライシングの変化をRFPの発現で可視化できるスプライシングレポーターを作成して培養細胞内に導入した。このレポーター細胞では、非感染状態の細胞はRFPが発現するが非感染細胞ではRFPの発現が消失しており、蛍光顕微鏡下で感染・非感染の識別が可能となった。このスプライシングレポーター細胞に種々のウイルス蛋白を発現させてウイルス由来のスプライシング制御因子を検索したところ、核外輸送蛋白ICP27がPML mRNAをII型からV型へ変換していることが判明した。ICP27のRNA認識機構は予想外に複雑であることが判明したので、CLIPと呼ばれる新しい研究手法でICP27の標的遺伝子転写産物の解析を進めている。

单纯疱疹病毒类型2（HSV-2）是一种DNA病毒，在全球范围内广泛传播，主要具有生殖器疱疹的症状。尽管HSV-2病毒基因组复制发生在宿主细胞的核中，但HSV-2基因组并未整合到宿主染色体中，而是以环状形式整合到宿主的染色体中，并将其掺入DOT样核结构ND10（PML身体，POD）中，该核结构，POD，主要由PML组成（PROMELELELELELELELOCLOCLOCOCYCYETIC PYUKEMIA PREUKEMIA，TRIMIA，TRIMIAS9）。 PML前MRNA经历替代剪接以产生七个PML同工型蛋白。我们发现HSV-2感染影响了PNL前MRNA的替代剪接，并改变了PML蛋白的同工型。也就是说，I型和II型PML主要在未感染的细胞中表达，而V型主要在HSV-2感染的细胞中表达。创建了一个剪接报告基因，该剪接记者允许通过RFP表达可视化替代剪接的这种改变并引入培养的细胞中。在此报告基细胞中，未感染状态的细胞表达RFP，但在未感染的细胞中，RFP表达消失，使得有可能区分荧光显微镜下感染和未感染的感染和未感染。当在这些剪接报道细胞中表达各种病毒蛋白时，搜索病毒衍生的剪接调节剂时，发现核出口蛋白ICP27将PML mRNA从II型转换为V型。由于ICP27的RNA识别机制ICP27的RNA识别机制是出乎意料的，因此我们发现了ICP27的clip nek a New nek a n a a nek a a nek nek nek nek a nek a nek a n a nek a n a n a a a nek a a nek of of of of of of of of of of of of of of of of of sof of of of icp2。