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ABC蛋白の機能の多様性の分子基盤

ABC蛋白功能多样性的分子基础

基本信息

批准号：
10217205
负责人：
植田和光
金额：
$ 61.7万
依托单位：
Kyoto University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
1998
资助国家：
日本
起止时间：
1998 至 2002
项目状态：
已结题

项目摘要

ABCタンパク質は、よく保存されたATP結合領域をもつ膜タンパク質の総称であり、いずれもATPによって駆動あるいは制御されているが、機能はトランスポータ、チャネル、レセプターと多様である。本研究は、ABCタンパク質の機能の多様性の分子基盤を明らかにするために、レセプター型およびトランスポータ型ABCタンパク質のATPとの相互作用の違いを生化学的、分子生物学的、構造生物学的に解明しようとしている。細胞内および体内のコレステロールなどの脂質のホメオスタシスへのABCA1遺伝子の関与が最近明らかになりつつあるが、その分子メカニズムはいまだ不明である。我々は、血中の高密度リポタンパク質が消失する遺伝病であるタンジール病で見出された変異を導入したABCA1および野生型のGFP融合タンパク質(ABCA1-GFP)を安定的に発現するHEK293細胞株を作製した。蛍光顕微鏡による融合タンパクの蛍光解析とグリコシダーゼによる糖鎖型の解析から、野生型ABCA1とABCA1-W590S変異体は細胞膜に局在し、ABCA1-R587WとABCA1-Q597R変異体は小胞体に残留することが明らかになった。R587WとQ597R2つの変異体は細胞膜に局在できないためタンジール病を引き起こすと考えられる。ATPとの相互作用を検討するため、安定発現株から膜画分を調製し、ATP類似体8-azido-[α-32P]ATPで光親和性標識した。野生型ABCA1とABCA1-W590S変異体はMn存在下8-azido-[α-32P]ATPで標識され、バナジン酸によって標識量が増加した。W590S変異体は野生型と同様にATP結合、加水分解は起こることが明らかになった。

ABC is the most important part of ATP binding domain. It is the most important part of ATP binding domain. ABC is the most important part of ATP binding domain. ABC is the most important part of ATP binding domain. This study aims to clarify the functional diversity of ABC molecules and their interaction with ATP in biochemical, molecular and tectonic biology. The relationship between ABCA1 gene and intracellular and in vivo lipid metabolism is unknown. HEK293 cell line was produced by introducing ABCA1 and wild-type GFP fusion protein (ABCA1-GFP) into HEK293 cells. The mutant ABCA1-W590S and ABCA1-R587W were isolated from the cell membrane of the mutant ABCA1-Q597R. R587W and Q597R2 are different from each other in cell membrane. ATP interaction is investigated, and the photoaffinity of ATP analog 8-azido-[α-32P]ATP is identified. In the presence of Mn, the amount of 8-azido-[α-32P]ATP in wild-type ABCA1 and ABCA1-W590S increased. W590S is a mutant wild-type protein that binds ATP and hydrolyzes water.