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Ca-ATPaseの電子線・X線結晶解析

Ca-ATP 酶的电子束/X 射线晶体分析

基本信息

批准号：
11169205
负责人：
豊島近
金额：
$ 23.62万
依托单位：
The University of Tokyo
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
1999
资助国家：
日本
起止时间：
1999 至 2002
项目状态：
已结题

项目摘要

本研究では、筋小胞体カルシウムATPaseの結晶構造解析により、膜蛋白質の結晶中の脂質二重膜の可視化を主な目標とした。これは、カルシウムATPaseの結晶化にあたって脂質を添加しているために脂質二重膜が形成されていることを利用するものである。脂質二重膜は低分解能領域にしか寄与しないので、普通の結晶解析では棄てている。また、重原子置換体による位相情報は、低分解能領域では信頼性が無い。このために、コントラスト変調法が試みられて来た。また.MAD法(多波調異常分散法)の適用も試みられるべきである。この目的のために、現在最も安定して作成できるカルシウムATPaseの結晶である、Mg/F複合体結晶を用い、庶糖と金グルコースによる密度変調を試みた。この結果,庶糖の方が可変できる範囲は広いものの,格子定数の変化も著しいことがわかった。金グルコースの場合,最大濃度は15%程度であったが,金による異常分散効果を利用できるため,コントラスト変調を用いる必要はない。また、格子定数の変化も無視できる程度であることがわかった。そこで,最大濃度の金グルコースを用いて,SPring-8でMADデータの収集を行った。その結果は現在解析中であるが、統計的には十分な信号が得られた。MADデータから位相を決定することは、重原子位置が離散的でないため無理であるが、蛋白質部分からの位相を改良することは十分可能であろうと考えられる。この部分の方法論はまだ確立していないので、今後の課題としたい。

The purpose of this study is to analyze the crystal structure of the mitochondrial ATPase and visualize the lipid double membrane in the membrane protein crystal. The crystallization of these enzymes results in the formation and utilization of lipid double membranes. Lipid double membrane is the domain of low decomposition energy, and the domain of ordinary crystallization analysis. The phase information of heavy atom substitution is zero, and the reliability of low decomposition energy field is zero. This is the first time I've ever been to a school. MAD method (multi-wave modulation anomaly dispersion method) is applied to the test. The purpose of this study is to make the crystal of Mg/F complex more stable, and to adjust the density of Mg/F complex crystal. As a result, the sugar content can be changed, and the lattice number can be changed. In the case of gold, the maximum concentration is about 15%, and the abnormal dispersion of gold is necessary for the use of gold.また、格子定数の変化も无视できる程度であることがわかった。For example,SPring-8 can be used to collect the maximum concentration of gold. The result is that the analysis of the current situation, statistics, the signal is very good. The position of heavy atoms is not reasonable. The position of protein is not reasonable. The methodology of this part has been established and the future problems have been established.