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がん細胞におけるアポトーシスの分子解析

癌细胞凋亡的分子分析

基本信息

批准号：
12215156
负责人：
垣塚彰
金额：
$ 29.82万
依托单位：
Kyoto University (2001-2004)Osaka Bioscience Institute (2000)
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
2000
资助国家：
日本
起止时间：
2000 至 2004
项目状态：
已结题

项目摘要

細胞死・細胞増殖に関わる新規遺伝子・蛋白質として同定したAAA familyのATPaseであるVCP蛋白質について解析を行い、以下の諸点を明らかにした。(1)抗VCP抗体を用いて、正常組織及び各種癌組織でVCPの発現を解析した。マウス正常組織では、管腔構造をとる上皮系の細胞や免疫系細胞、乳腺上皮、胃酸合成細胞などの分泌系の細胞に強い発現を認めた。一方、ヒト癌由来の組織では、特に腺癌と扁平上皮癌に強い発現を認めた。(2)RNAi法を用いて、HeLa細胞で内在性のVCPを98%以上ノックダウンすることに成功した。このHeLa細胞では、紡錘体極の数が不安定になり、娘細胞に正しく染色体を分配することができなくなっていた。その結果、M期の終了後、細胞周期の停止もしくは細胞死に陥っていた。(3)VCP蛋白質内であるリン酸化を受けたアミノ酸を特異的に認識する抗体を作成し、培養細胞を免疫染色すると紡錘体極やセントロゾームが染色された。(4)外来性のVCPを誘導発現させることができる出芽酵母を作り、その酵母をEMSで処理してDNA変異を導入後、VCPの存在の有無で発育に差のでる温度感受性株を得た。その温度感受性株をゲノムライブラリーでトランスフォームし、温度感受性をレスキューする8つのゲノム断片を得た。(5)VCPをアセチル化する酵素の精製を進め、アセチル化活性のある分画に特異的と思われる蛋白質のバンドを数個にまで絞り込むことができた。

Cell death, cell proliferation, new genes, proteins, AAA family, ATPase, VCP protein analysis, the following points are clear (1)Anti-VCP antibodies were used to analyze the expression of VCP in normal tissues and various cancer tissues. Normal tissue, lumen structure, epithelial cells, immune cells, mammary epithelium, gastric acid synthesis cells, and secretory cells are strongly recognized. The origin of cancer is recognized as adenocarcinoma and squamous cell carcinoma. (2) More than 98% of HeLa cells were successful in using RNAi method. The number of spindle poles in HeLa cells is unstable, and the number of chromosomes in HeLa cells is unstable. After the end of the M phase, the cell cycle stops and the cell dies. (3)VCP protein protein in the production of anti-acid specific antibodies, culture of cells to immunostain, spindle electrode staining. (4)Exotic VCP induction and development, yeast germination, EMS treatment, DNA transformation, VCP existence and development, temperature sensitive strains were obtained. The temperature sensitivity of the plant is determined by the temperature sensitivity of the plant. (5) The purification of VCP and the separation of VCP and VCP activities are carried out in several ways.