权益分类	功能权益	普通用户	{{item.name}}会员
{{category.name}}	{{benefitItem.name}}

がん治療をめざしたアデノウイルスベクターを用いた発現制御法の開発

使用腺病毒载体开发用于癌症治疗的表达控制方法

基本信息

批准号：
12217028
负责人：
斎藤泉
金额：
$ 109.44万
依托单位：
The University of Tokyo
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
2000
资助国家：
日本
起止时间：
2000 至 2004
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-12217028/
关键词：
アデノウイルスベクター guttedベクター部位特異的組換え酵素 Cre loxP FLP FRT 遺伝子治療遺伝子置換反応ウイルスベクター発現制御アデノウイルスウィルスベクター遺伝子置換アデノウィルスレトロウイルスベクターリボザイム

项目摘要

がんの遺伝子治療の実用化に向けて本研究ではがん細胞特異的高度発現機能を有する改良型アデノウイルスベクターとして、がん細胞特異的プロモーターから部位特異的組換え酵素を発現する「制御ユニット」と強力なプロモーターからの目的遺伝子の発現をOFFからONへと制御する「発現標的ユニット」を一つのウイルスベクターに組み込む「単一型特異的高度発現ベクター」作製法の開発を行ってきた。このベクターにはヘルパーウイルス依存型アデノウイルスベクター(guttedベクター)を応用するため、guttedベクターの効率的な作製法の開発が必須であり、部位特異的組換え酵素の遺伝子置換反応を応用した全く新しいベクター作製法の開発に取り組んでいる。一般的に発現効率が劣る細胞特異的プロモーターからの発現量を確保するために、制御ユニットには組換え効率が高いCreの応用が必須であり、ベクター作製にはFLPを応用する必要性が生じたが、FLPは組換え効率がCreと比べ劣るためFLPの改良を行ってきた。本年度はFLPの温度安定型として報告された4アミノ酸変異体FLPeと本研究で我々が新規に合成し作製したFLPeのcodon usageをヒト型化したhFLPeの組換え効率をFLPと詳細に比較した。新たに作製したペプチド抗体を用いた解析からhFLPeのタンパク質量はFLPと比べ数十倍上昇していたことが明らかとなったが、組換え効率はFLPやFLPeとほぼ同程度であり、高度に発現したFLPは細胞への影響を示す可能性が示唆された。しかし本研究で樹立化したFLPやhFLPe発現293細胞は、予想に反してCre発現293細胞よりも高い組換え効率とベクター生成効率を示しており、これらの細胞株を用いることでguttedベクター作製の高効率化が図られるものと考えている。

In this study, we have developed an improved version of the gene therapy system for the development of cell-specific, highly reactive functions. The development of a method for producing cell-specific, site-specific, component enzymes is carried out by turning OFF the "control" and "strong" component enzymes, and turning off the "control" and "component enzymes," and "single-type specific, highly reactive" component enzymes. The development of a method for the production of effective enzymes must be based on the use of site-specific components of enzyme gene replacement enzymes. The general efficiency of FLP is lower than the cell-specific efficiency of FLP. The efficiency of FLP is higher than that of Cre. The improvement of FLP is necessary. This year's FLP temperature stability report shows that FLP has a high temperature stability. The analysis of the new system shows that the quality of FLP is tens of times higher than that of FLP. The change rate of FLP is the same as that of FLP. In this study, we established the FLP and hFLPe discovery 293 cells, which were used to study the high efficiency of cell culture.