極微量DNAをクロ-ン化できるシャロミドベクタ-の開発と応用

可克隆极微量DNA的chalomid载体的开发及应用

• 批准号: 01570259
• 负责人: 斎藤 泉
• 金额: $ 1.22万
• 依托单位: 国立予防衛生研究所
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for General Scientific Research (C)
• 财政年份: 1989
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1989 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-01570259/
• 关键词: クロ-ン化ベクタ-; シャロミド; B型肝炎ウイルス; C型肝炎ウイルス; PCR法; ウイルスゲノム

極微量のウイルスゲノム・cDNAのクロ-ン化を目的として、一連のシャロミドベクタ-(ラムダファ-ジベクタ-と同等のクロ-ン化効率を持ちながら、大きさや構造を自由に改変できるコスミドベクタ-)を作製した。まず一本の肝組織針生検から抽出したDNAの一部、わずか5マイクログラムからB型肝炎ウイルス(HBV)ゲノムの全長をクロ-ンできるシャロミドSを開発した。このベクタ-は制限酵素SalIをクロ-ン化部位に持ち、XhoIで直鎖状にしたHBVゲノムを選択的にクロ-ン化できる特徴を持っている。それにより肝炎患者針生検組織から、このウイルスがコ-ドする逆転写酵素を発現すると思われる新しいHBVRNAの同定に成功した。またさらにこのベクタ-に改良を加えたシャロミドSBを開発した。このベクタ-は、制限酵素SnaBIをクロ-ン化部位に持ち、平滑末端にしたほとんど全てのDNA断片を選択的に(すなわち、インサ-トを持った組換え体のみが大腸菌のコロニ-を作るように)クロ-ン化することができる。これを用いて、タイ国のHBV保因者の血清のわずか1m1からHBVゲノムの全長のクロ-ン化に成功した。この場合、クロ-ン化に用いたXhoIで直鎖状にしたHBVゲノムは再びXhoIを用いて切り出せる点が、シャロミドSよりも優れている。またこのシャロミドSBは、特にPCR法により増幅されたC型肝炎ウイルス(HCV)のcDNAのクロ-ン化にきわめて有用であることが示された。これらのベクタ-の使用法が確立されたことにより、微量のウイルス遺伝子のクロ-ン化がより容易に出来ることになった。

The amount of dust must be controlled by the target and sequence of cDNA translation. The target and sequence of cDNA translation must be controlled by the sequence of cDNA translation. A part of DNA extracted from the liver tissue of this gene was found to be the full length of hepatitis B virus (HBV). The characteristics of the restriction enzyme SalI, XhoI, and HBV DNA binding sites are discussed. The expression of HBV RNA in hepatitis B patients was detected by reverse transcription enzyme. This is the first time I've ever seen someone who's been in the business. The restriction enzyme SnaBI is selected from the DNA fragments of E. coli and its components. The restriction enzyme SnaBI is selected from the DNA fragments of E. coli. The serum of HBV carriers in China has been successfully transformed into HBV carriers with a total length of 1m1. In this case, XhoI is used to directly lock HBV into the system. XhoI is used to cut off the system from the system. The cDNA of HCV was amplified by PCR and found to be useful. The use of this method is easy to establish and trace.

项目成果

S.Boonmar et al.: "Isolation of hepatitis B virus genome clone from a hepatitis B patient in Thai." Journal of Medical Virology.

S.Boonmar 等人：“从泰国乙型肝炎患者身上分离出乙型肝炎病毒基因组克隆。”

K.Takeuchi et al.: "Hepatitis C viral cDNA clsnes isolated from a healthy carrier donor implicated in postーtransfusion nonーA,nonーB hepatitis" Gene. (1990)

K.Takeuchi 等人：“从健康携带者供体中分离出的丙型肝炎病毒 cDNA 克隆与输血后非甲型、非乙型肝炎有关”基因 (1990)。

K.kajino et al.: "Efficient cloning of hepatifis B virus DNA from single-strand repticative intermediates:appl:cation for S1 mapping of viral RNAs in the human liver tissno." Journal of Medical virology.

K.kajino 等人：“从单链复制中间体中高效克隆乙型肝炎病毒 DNA：用于人类肝脏中病毒 RNA 的 S1 作图”。

K.kajino et al.: "Novel Spliced hepatitis B virus RNA possibly coding for the viral polymerase detected in a patient liver tissue." Journal of Virology.

K.kajino 等人：“新型剪接乙型肝炎病毒 RNA 可能编码患者肝组织中检测到的病毒聚合酶。”