内皮由来過分極因子の分離・同定・機能解析

内皮源性超极化因子的分离、鉴定和功能分析

• 批准号: 13024201
• 负责人: 三輪 聡一
• 金额: $ 2.3万
• 依托单位: Hokkaido University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
• 财政年份: 2001
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2001 至 2002
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-13024201/
• 关键词: 内皮由来過分極因子; Kチャネル; ギャップジャンクション; ラット腸管膜動脈; コネキシン; 血管内皮細胞; 血管平滑筋細胞; 内皮由来弛緩因子; チトクロームP450

本研究の目的は、内皮由来過分極因子(EDHF)およびEDHF反応に関与する関連遺伝子群を、分子生物学的に捕らえようとするものである。我々は、EDHFを同定するために、まずクローン化したKチャネルを用いたEDHFのバイオアッセイ系の確立を試みた。ラット腸間膜動脈において各種Kチャネル阻害薬の作用を検討したところ、EDHF反応に関与するKチャネルとしては、Ca^<2+>-activated K^+ channel(KCa)が想定された。RT-PCRを施行したところ、ラット腸管膜動脈には三種類のKCaが発現していることが確認された。その中の一つであるBK channel遺伝子をHEK細胞に発現させると、脱分極ならびに細胞内カルシウムイオンの上昇に伴い活性化されるK電流が確認された。EDHFの候補として、チトクロームP450代謝産物であるepoxyeicosatrienoic acid(EET)があげられている。そこで、EETのBK channelに対する作用を検討すると、EETはBK channelの電流を増加させ、その作用機序としてはGαsの活性化を介して働くことが確認された。また、ある種の血管ではEDHF反応にギャップジャンクション(GJ)が関与することが報告され、この点について検討した。ラット腸管膜動脈において、EDHF反応はGJを阻害する薬剤でほぼ完全に抑制された。次に、GJを構成するコネキシン(CX)を腸管膜動脈で検討した結果、少なくとも4種類のCX(CX37,40,43,45)が存在することが判明した。免疫組織染色により各CXの分布を検討すると、CX40は内皮細胞に、CX43は内皮と平滑筋細胞に広く分布していた。現在この4分子をクローニングおよび細胞に発現させて、それぞれの分子のEDHF反応に対する役割について検討を重ねている。

The purpose of this study is to investigate the relationship between endothelial-derived hyperpolarization factor (EDHF) and EDHF in molecular biology. We try to determine whether the EDHF system is correct or not. The role of various K + channels in the inhibition of K + generation in the gut membrane artery is discussed. Ca^<2+>-activated K^+ channel(KCa) is considered to be related to K + generation. RT-PCR was used to detect and identify three kinds of KCa in intestinal membrane artery. In addition, the BK channel gene is detected in HEK cells, depolarized, and activated in HEK cells. EDHF and its derivatives, epoxyeicosatrienoic acid(EET) EET BK channel activation The blood vessels of the EDHF are not in the same condition as those of the EDHF. EDHF is the most effective inhibitor of GJ in the gut. The results of the study on the composition of the GJ and the intestinal membrane artery showed that four types of CX(CX37,40,43,45) existed. Immunohistochemical staining revealed the distribution of CX, CX40 and CX43 in endothelial cells. Now these four molecules are involved in the development of EDHF and cellular processes, and they are involved in the development of EDHF and cellular processes.

项目成果

Yoshifumi Kawanabe: "Molecular mechanism for endothelin-1-induced stress fiber formation; Analysis of G proteins using mutants of endothelin type A receptor"Mol. Pharmacol.. 61(2). 277-284 (2002)

Yoshifumi Kawanabe：“内皮素-1 诱导的应激纤维形成的分子机制；使用内皮素 A 型受体突变体分析 G 蛋白”Mol。

Kawanabe, Y.: "Molecular mechanisms for the activation of voltage-independent Ca^<2+> channels by endothelin-1 in Chinese hamster ovary cells stably expressing human endothelin_A receptors"Mol Pharmacol. 62(1). 75-80 (2002)

Kawanabe，Y.：“稳定表达人内皮素_A受体的中国仓鼠卵巢细胞中内皮素-1激活电压非依赖性Ca ^ 2 通道的分子机制”Mol Pharmacol。

Hidekatsu Furutani: "Comparison of Ca^<2+> entry channels involved in contractions of rat aorta induced by endothelin-1, noradrenaline and vasopressin"J. Cardiovasc. Pharmacol.. (in press). (2001)

Hidekatsu Furutani：“内皮素-1、去甲肾上腺素和加压素诱导的大鼠主动脉收缩中涉及的Ca ^ 2 进入通道的比较”J。

Kawanabe, Y.: "Molecular mechanism for endothelin-1-induced stress fiber formation : Analysis of G proteins using mutants of endothelin type A receptor"Mol Pharmacol. 61(2). 277-284 (2002)

Kawanabe, Y.：“内皮素-1 诱导的应激纤维形成的分子机制：使用内皮素 A 型受体突变体分析 G 蛋白”Mol Pharmacol。

Ken Lee: "Failure of endothelin-1 to activate store-operated Ca^<2+> channels by lack of mobilization from intracellular Ca^<2+> stores in cultured bovine adrenal chromaffin cells"Naunyn-Schmiedeberg's Arch. Pharmacol.. 364. 42-46 (2001)

Ken Lee：“由于培养的牛肾上腺嗜铬细胞中细胞内Ca ^ 2 储存缺乏动员，内皮素-1 未能激活钙池操纵的Ca ^ 2 通道”Naunyn-Schmiedebergs Arch。