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神経可塑性制御に対するPKCの役割-トランスジェニックマウスを用いた研究-

PKC 在调节神经可塑性中的作用 -使用转基因小鼠的研究 -

基本信息

批准号：
13035030
负责人：
酒井規雄
金额：
$ 2.56万
依托单位：
Hiroshima University (2002)Kobe University (2001)
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
2001
资助国家：
日本
起止时间：
2001 至 2002
项目状态：
已结题

项目摘要

(1)Tet制御システムを用いたγPKC-GFP,εPKC-GFPトランスジェニックマウスの解析neuron specific enolase promoterの下流にtTAを発現するマウス(NSE-tTA)、calcium calmodulin kinaseII promoterの支配下にtTAを発現するマウス(CamKII-tTA)と掛け合わした際のPKC-GFPの発現部位の特徴についての解析はほぼ終了した。現在、NSE-tTA x γPKC-GFPバイトランスジェニックマウスから小脳生スライスを作製し、γPKC-GFP発現小脳プルキンエ細胞において、2光子励起レーザー顕微鏡や高感度CCDカメラを用いて、γPKCのトランスロケーションの観察を試みた。各種グルタミン酸受容体作用薬、あるいは電気刺激により、γKCのトランスロケーションが観察可能で刺激に応じてPKC-GFPのトランスロケーションが伝播していくライブイメージをとらえることが可能になった。また、CamKII-tTAマウスとγPKC-GFPマウスを掛け合わせ、海馬を含む前脳全体にγPKC-GFPが発現するマウスにおいてもγPKCのトランスロケーションの観察を試みを行っている。このように、我々の作成したマウスはターゲティングを指標にPKCの神経系での機能を解析するツールとなるだけでなく、神経の興奮の伝播を蛋白質レベルで明瞭にイメージングすることが出来る新しい神経機能解析のための遺伝子操作動物であると考えられる。(2)PKCターゲティングを脳部位特異的に減弱させたトランスジェニックマウスを作製し神経特異的機能とPKCとの関連を明らかにする。δPKC γPKCのPDK1リン酸化部位をアラニンに変異させた変異体を作成し、培養細胞に発現させ受容体刺激に伴うトランスロケーションを観察したところ、野生型に比し、細胞膜に長くとどまることが明らかになった。このように、PDK1はPKCをリン酸化することによりターゲティングを調節しうることが明らかになった。

(1) Tet-controlled システムを uses いたγPKC-GFP, εPKC-GFP トランスジェニックマウスの to analyze neuron specific enolase promoterの流にtTAを発成するマウス(NSE-tTA), calcium calmodulin kinaseII Under the control of promoter, CamKII-tTA (CamKII-tTA) and PKC-GFP PKC-GFP are analyzed and analyzed. Now, NSE-tTA x γPKC-GFP Published cellsにおいて, 2-photon excited レーザー镕micromirror and high-sensitivity CCD カメラを用いて、γPKCのトランスロケーションの観看をtrialみた. Various グルタミン acid receptors, あるいは电気stimulated により, γKC のトランスロケーションが禳Observation may not be irritating.応じてPKC-GFPのトランスロケーションが伝 broadcastしていくライブイメージをとらえることがpossibleになった.また、CamKII-tTAマウスとγPKC-GFPマウスを Hangingけ合わせ、海马を干む前脳all にγP KC-GFP が発开恙るマウスにおいてもγPKC のトランスロケーションの観看をtrial みを行っている.このように、我々の成したマウスはターゲティングをindexにP KC's 神経system's functional analysis するツールとなるだけでなく、神経のExcited の伝 broadcast をprotein レベルで明にイメージングすることが出る新しい神経 function analysis のための缝子 manipulates animals であると考えられる. (2)PKC ターゲティングを脳 site-specific に weakening させたトランスジェニックマウスをし神経Special function and PKC related を明らかにする. δPKC γPKC's PDK1 acidification site was synthesized and the allotype was produced, and the cultured cells were exposed and the receptor was stimulated. Ban Toro's したところ, wild type The cell membrane is long and the cell membrane is long.このように, PDK1 PKC をリン acidified することによしうることが明らかになった.