ノックアウトマウスを用いたRasファミリータンパク質の機能解析

使用敲除小鼠进行 Ras 家族蛋白的功能分析

• 批准号: 13216116
• 负责人: 服部 成介
• 金额: $ 25.86万
• 依托单位: The University of Tokyo (2002-2004)National Center of Neurology and Psychiatry (2001)
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
• 财政年份: 2001
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2001 至 2004
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-13216116/
• 关键词: Ras; Gap1m; ノックアウトマウス; Rap1; ERK; p38 MAPキナーゼ; プロテオミクス; GTPase; Chat; MAPキナーゼ; ファイブロネクチン; 細胞接着

Rasファミリー因子の個体内機能を明らかにする目的で、以下の実験を行なった。Ras抑制性因子Gap1^mノックアウトマウスの作成に関して、組換えアレルを有するES細胞クローンを複数作成し、キメラマウスの作成を行なった。しかし変異アレルをもったF1マウスを研究期間内のうちに得ることができなかった。またカルシウムシグナリングに応答するsmall GTPase Rinのノックアウトマウスを作成したが、顕著な形質変化は見いだせていない。Rasファミリー因子の標的因子として、多くのタンパク質キナーゼが活性化され、さらにシグナルを伝達していくことが示されている。そこで、これらのキナーゼが関与するシグナル伝達系の全貌を明らかにすべく、金属キレートカラムを用いたリン酸化タンパク質の精製と2次元ゲル電気泳動を組合わせることにより、ERKシグナル伝達系の構成因子であるMEK、ERK、RSKの活性化を可視化した。さらに新規ERK基質と考えられる因子の同定を行ない、当該因子が細胞中でERKによりリン酸化されることを明らかにした。これらのERK基質を試験管内でリン酸化し、さらにリン酸化ペプチドを質量分析器で構造解析することにより、基質リン酸化部位の同定を行った。同様のアプローチをp38 MAPキナーゼ系にも応用し、p38 MAPキナーゼカスケードの中でリン酸化される基質を網羅的に検索した。その結果、p38 MAPキナーゼによってリン酸化を受けて活性化されるMAPKAPK-2の基質であるBAG2タンパク質を同定し、そのリン酸化部位を決定した。

The purpose of Ras 'in vivo function is to clarify and implement the following Ras inhibitory factor Gap1 is related to the formation of ES cells. The study period is different. The small GTase Rin can be made from a variety of materials. The target factor of Ras The complete picture of the MEK system can be visualized by the combination of ERK, ERK and RSK. The expression of ERK in cells is regulated by the expression of ERK in cells. The ERK matrix is acidified in the tube, and the mass analyzer is used to analyze the structure of the ERK matrix. In the same way, p38 MAP is used to search for information. The results showed that MAPKAPK-2 was activated by p38 MAP, and the MAPKAPK-2 was activated by BAG-2.

项目成果

Tsuruta, F. et al.: "JNK promotes Bax translocation to mitochondria through phosphorylation of 14-3-3 proteins"EMBO J.. (印刷中). (2004)

Tsuruta, F. 等人：“JNK 通过 14-3-3 蛋白的磷酸化促进 Bax 易位至线粒体”EMBO J..（出版中）。

Proteomic identification of Bcl-2 assocated athanogene 2 as a novel MAPK-activated protein kinase 2 substrate

Bcl-2 相关的 athanogene 2 作为新型 MAPK 激活蛋白激酶 2 底物的蛋白质组学鉴定

• 发表时间: 2004
• 期刊: Journal of Biological Chemistry 279
• 作者: Ueda;K.et al.
• 通讯作者: K.et al.

Sakakibara A, Hattori S, Nakamura S, Katagiri T: "A novel hematopoietic adaptor protein, Chat-H, positively regulates T cell receptor-mediated interleukin-2 production by Jurkat cells"J.Biol.Chem.. 278. 6012-6017 (2003)

Sakakibara A、Hattori S、Nakamura S、Katagiri T：“一种新型造血衔接蛋白 Chat-H，可正向调节 Jurkat 细胞产生 T 细胞受体介导的白细胞介素 2”J.Biol.Chem.. 278. 6012-6017

Yunoue, S.et al.: "Neurofibromatosis type I tumor suppressor neurofibromin regulates neuronal differentiation via its GTPase-activating protein function toward Ras."J.Biol.Chem.. 278. 26958-26969 (2003)

Yunoue, S.等人：“神经纤维瘤病 I 型肿瘤抑制神经纤维蛋白通过其 GTP 酶激活蛋白功能对 Ras 调节神经元分化。”J.Biol.Chem.. 278. 26958-26969 (2003)

Iida, N., Namikawa, K., Kiyama, H., Ueno, H., Nakamura, S., Hattori S.: "Requirement of Ras for the activation of mitogen-activated protein kinase by calcium influx, cAMP, and neurotrophin in hippocampal neurons"J. Neurosci.. 21巻17号. 6459-6466 (2001)

Iida, N.、Namikawa, K.、Kiyama, H.、Ueno, H.、Nakamura, S.、Hattori S.：“钙流入、cAMP 和神经营养素激活丝裂原激活蛋白激酶需要 Ras海马神经元”J. Neurosci.. Vol. 21, No. 17. 6459-6466 (2001)