小脳プルキンエ細胞の長期抑圧成立における細胞内シグナル伝達系の解析

小脑浦肯野细胞长期抑制过程中细胞内信号转导系统分析

基本信息

  • 批准号:
    08270246
  • 负责人:
  • 金额:
    $ 1.28万
  • 依托单位:
  • 依托单位国家:
    日本
  • 项目类别:
    Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
  • 财政年份:
    1996
  • 资助国家:
    日本
  • 起止时间:
    1996 至 无数据
  • 项目状态:
    已结题

项目摘要

神経栄養因子により、シナプス機能が強化されることが神経・筋細胞シナプスおよび海馬スライスを用いた実験により示されている。そこで本研究においては神経栄養因子の作用により活性化されることが示されているRasおよびMAPキナーゼカスケードを遮断した際に、どのような効果が見られるか検討した。方法としてドミナントネガティブRasおよびMAPキナーゼの特異的不活化ホスファターゼであるCL100を発現するアデノウィルスベクターを用い、これを脳内に注入することにより目的とする神経細胞に感染させ、その効果を見ることとした。βガラクトシダーゼを発現するウィルスを海馬CA1領域に注入したところ、βガラクトシダーゼの発現が感染後24時間以内に見られ、その発現が少なくとも1カ月持続することを確認した。現在海馬スライスを用いた長期増強の測定計をセットアップして目的とするアデノウィルス感染の効果を判定している。これと並行して、小脳プルキンエ細胞内のMAPキナーゼカスケードの機能を明らかにする目的で、プルキンエ細胞特異的な転写開始プロモーターであるL7プロモーターにCL100遺伝子を連結し、さらにその下流に遺伝子発現のモニターとしてIRES(内部リボソーム結合部位)を介してβガラクトシダーゼ遺伝子を連結したプラスミドを構築し、マウス受精卵に導入した。62匹中2匹に目的とするプラスミドの導入が見られたことを確認したので、現在小脳におけるCL100遺伝子発現を確認している。遺伝子発現を確認した後、当該マウスよりプルキンエ細胞を単離して電気生理学的な解析、またマウスの行動異常の有無等について検討を加える予定である。
Neurotrophic factors are enhanced in the brain and hippocampus. In this study, the role of neurotrophic factors in the activation of Ras and MAP was studied. Methods: To detect the specific inactivation of Ras and MAP in human brain cells, and to detect the specific inactivation of Ras and MAP in human brain cellsβ-rays were detected within 24 hours after infection, and the results were confirmed within 1 month. Now the hippocampus is used to determine the long-term increase in infection. In parallel, the small cell MAP and the function of the cell are clearly defined. In addition, the cell specific function of the cell is defined. In addition, the cell specific function of the cell is defined.(Internal coupling sites) The introduction of fertilized eggs into the system 2 out of 62 items were identified as CL100 items. After the occurrence of the gene is confirmed, when the gene is detected, the cell is isolated and the electrophysiological analysis is performed, and the presence or absence of abnormal behavior of the gene is discussed.

项目成果

期刊论文数量(6)
专著数量(0)
科研奖励数量(0)
会议论文数量(0)
专利数量(0)
Jian,Z.,Nonaka,I.,Hattori,S.,Nakamura,S.: "Activation of Ras and protection from apoptotic cell death by BDNF in PC12 cells expressing TrkB." Cell.Signal.8. 365-370 (1996)
Jen,Z.,Nonaka,I.,Hattori,S.,Nakamura,S.:“表达 TrkB 的 PC12 细胞中 BDNF 激活 Ras 并防止细胞凋亡。”
  • DOI:
  • 发表时间:
  • 期刊:
  • 影响因子:
    0
  • 作者:
  • 通讯作者:
Li,H.-Z.,Kawasaki,H.,Nishida,E.,Hattori,S.,Nakamura,S.: "Ras regulated hypophosphorylation of the retinoblastoma protein mediates neuronal differentiation in PC12 cells." J.Neurochem.66. 2287-2294 (1996)
Li,H.-Z.、Kawasaki,H.、Nishida,E.、Hattori,S.、Nakamura,S.:“Ras 调节视网膜母细胞瘤蛋白的低磷酸化介导 PC12 细胞中的神经元分化。”
  • DOI:
  • 发表时间:
  • 期刊:
  • 影响因子:
    0
  • 作者:
  • 通讯作者:
Li,S.,Satoh,H.,Watanabe,T.,Nakamura,S.,Hattori,S.: "cDNA cloning and chromosomal mapping of human Gaplm,a novel GTPase-activating protein toward Ras." Genomics. 35. 625-627 (1996)
Li,S.,Satoh,H.,Watanabe,T.,Nakamura,S.,Hattori,S.:“人 Gaplm(一种针对 Ras 的新型 GTP 酶激活蛋白)的 cDNA 克隆和染色体定位。”
  • DOI:
  • 发表时间:
  • 期刊:
  • 影响因子:
    0
  • 作者:
  • 通讯作者:
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知道了