動物細胞における新たなRasシグナル伝達系の解析

动物细胞中新的 Ras 信号系统分析

• 批准号: 08265271
• 负责人: 服部 成介
• 金额: $ 1.6万
• 依托单位: National Center of Neurology and Psychiatry
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
• 财政年份: 1996
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1996 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-08265271/
• 关键词: RAS; M期

われわれは、出芽酵母においてRAS1、RAS2およびRAS類似遺伝子RSR1遺伝子を破壊した菌株は致死となり細胞周期のM期で増殖を停止することから、RASタンパク質がcAMP合成酵素の活性を調節し細胞周期G1期の進行を司るだけでなく、細胞周期M期の終了にも関与していることを示した。今年度の本研究においては、以下の実験結果を得た。1.RAS1、RAS2、RSR1三重遺伝子欠損株の増殖を相捕する遺伝子群相互の関係を調べたところ、RAS→LTE1(small GTPaseの活性化因子)→TEM1(small GTPase)→DBF2、CDC5、CDC15(いずれもセリンスレオニンキナーゼ)という情報伝達系が存在することを見いだした。そこでTEM1の温度変異株を作成し、この菌株に酵母細胞内で発現可能なHela細胞およびJurkat細胞由来のcDNAライブラリーを導入し、温度変異株が増殖できない温度での生育を回復する動物細胞由来の遺伝子を単離した。単離したcDNAを決定したところ、hCDC10(中間径フィラメントの構成成分)、nucleolin等の既知の遺伝子の他に新規の遺伝子が単離できた。現在この遺伝子の機能について検討を加えている。2.TEM1タンパク質のGTP結合ドメインは典型的なsmall GTPaseとは異なっているためRASと類似の活性化型変異を作成することは困難であった。そこでTEM1遺伝子内部にPCR反応により無作為に変異を導入し低コピー数の発現でRAS1、RAS2、RSR1遺伝子欠損株の増殖を相捕するTEM1変異遺伝子を単離し、この遺伝子の変異を決定した。

The budding yeast RAS1, RAS2, and RAS-like genes RSR1 are responsible for the disruption of the cell cycle, the termination of cell cycle M, and the regulation of cAMP synthase activity in cell cycle G1. This year's study was conducted with the following results. 1. RAS1, RAS2, RSR1 triple heritage defective plant propagation phase capture of the genetic subgroup relationship between the modulation, RAS→LTE1(small GTase activation factor)→TEM1(small GTase)→ DBF2, CDC5, CDC15 (middle The temperature variation of TEM-1 mutants was observed in yeast cells, and the cDNA of Hela cells and Jurkat cells was introduced into the yeast cells. The temperature variation of TEM-1 mutants was observed in the growth and reproduction of TEM-1 mutants. The gene expression of hCDC10 (intermediate diameter), nucleolin, etc. is determined by the gene expression of hCDC10. Now, the function of this file is to add the file to the file. 2. TEM1 is a typical small GTase binding agent. It is difficult to make a similar active GTase binding agent. The PCR reaction inside TEM1 gene determines the presence of RAS1, RAS2, and RSR1 genes and the presence of RAS1, RAS2, and RSR1 genes.

项目成果

Jian,Z.,Nonaka,I.,Hattori,S.,Nakamura,S.: "Activation of Ras and protection from apoptotic cell death by BDNF in PC12 cells expressing TrkB." Cell.Signal.8. 365-370 (1996)

Jen,Z.,Nonaka,I.,Hattori,S.,Nakamura,S.：“表达 TrkB 的 PC12 细胞中 BDNF 激活 Ras 并防止细胞凋亡。”

Li,H.-Z.,Kawasaki,H.,Nishida,E.,Hattori,S.,Nakamura,S.: "Ras regulated hypophosphorylation of the retinoblastoma protein mediates neuronal differentiation in PC12 cells." J.Neurochem.66. 2287-2294 (1996)

Li,H.-Z.、Kawasaki,H.、Nishida,E.、Hattori,S.、Nakamura,S.：“Ras 调节视网膜母细胞瘤蛋白的低磷酸化介导 PC12 细胞中的神经元分化。”

Li,S.,Satoh,H.,Watanabe,T.,Nakamura,S.,Hattori,S.: "cDNA cloning and chromosomal mapping of human Gaplm,a novel GTPase-activating protein toward Ras." Genomics. 35. 625-627 (1996)

Li,S.,Satoh,H.,Watanabe,T.,Nakamura,S.,Hattori,S.：“人 Gaplm（一种针对 Ras 的新型 GTP 酶激活蛋白）的 cDNA 克隆和染色体定位。”