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リン酸化プロテオーム解析による腫瘍特異的転写制御機構の解明

通过磷酸蛋白质组分析阐明肿瘤特异性转录控制机制

基本信息

批准号：
18013013
负责人：
服部成介
金额：
$ 6.53万
依托单位：
Kitasato University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
2006
资助国家：
日本
起止时间：
2006 至 2007
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-18013013/
关键词：
リン酸化転写因子プロテオミクス LC-MS 2次元ゲル電気泳動

项目摘要

腫瘍特異的リン酸化を明らかにするためには、リン酸化タンパク質を対象としたプロテオミクス技術の開発が必須である。そこで、細胞内リン酸化タンパク質変動を網羅的に解析するため、リン酸化タンパク質の効率よい精製法を確立した。この方法と2次元ゲル電気泳動を組み合わせ、新規のERKおよびp38 MAPキナーゼ基質を多数同定した。新規基質の中で、アクチン線維架橋因子EPLINのERKによるリン酸化が膜ラフル形成に必要であること、wound healingにおける細胞先端においてEPLINがERKによりジン酸化されること、EPLINリン酸化が細胞運動性に重要であることを示した。また、核膜孔構成因子Nup50がERKリン酸化によりimportinβとの相互作用が低下することを示した。核内転写因子解析のため、上記システムと細胞分画法を組み合わせることにより、ERKによってリン酸化される新規転写因子およびクロマチンジモデジング因子を同定した。さらに、特定のキナーゼを用いて試験管内リン酸化反応によりキナーゼ基質を同定するシステムを構築した。このシステムは、細胞内全タンパク質の抽出、ホスファクーゼ処理によるリン酸化タンパク質の脱リン酸化反応、キナーゼ添加によるリン酸化反応、リン酸化タンパク質精製、2次元ゲル電気泳動またはLC-MSによる基質同定から構成され、特定のキナーゼ基質のみをリン酸化タンパク質とすることにより、基質同定を容易にしたものである。このシステムを利用して、p38 MAPキナーゼ基質を網羅的に積索し、2次元ゲル電気泳動では同定できなかった新規基質を同定した。この中には、核内転写因子、シグナル伝達系因子が多数含まれていた。

The development of technology is necessary for the development of specific technologies. A method for the purification of intracellular acid residues was established. This method is based on the two-dimensional electromigration, the new ERK and p38 MAP matrix. EPLIN and ERK are important for cell motility. In addition, the interaction between the nuclear membrane pore constituent Nup50 and impertin β is reduced during ERK phosphorylation. The analysis of nuclear transcription factors and cytoanalysis methods are combined to determine the new transcription factors and ERK transcription factors. In this case, the specific acid reaction in the test tube is constructed by the same method as that in the test tube. The structure of the system, the extraction of the whole substance in the cell, the acidification of the whole substance, the purification of the whole substance, the two-dimensional electrophoresis, the matrix identity, the structure of the whole substance in the LC-MS, the acidification of the whole substance in the whole substance, the purification of the whole substance and the whole substance. This is the first time that a new matrix has been created. Most of these factors include nuclear factors, nuclear factors, and nuclear factors.