遺伝子のコンディショナルな機能阻害の新手法

一种条件抑制基因功能的新方法

基本信息

批准号：
14011247
负责人：
古田寿昭
金额：
$ 3.65万
依托单位：
Toho University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
2002
资助国家：
日本
起止时间：
2002 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-14011247/
关键词：
ケージド化合物 RNA干渉核酸遺伝子光化学的スイッチ

项目摘要

遺伝子の機能を網羅的に解析するための新手法として、任意の遺伝子の機能を時期および部位特異的に阻害する方法の開発を目指した。網羅的解析における遺伝子の機能阻害法としては、2本鎖RNAを用いるRNAi法と、修飾オリゴヌクレオチドによるアンチセンスオリゴヌクレオチド法が有望である。これらとケージド化合物の化学を組み合わせることで、特定の時期に特定の細胞(組織)で任意の遺伝子の機能を阻害(または破壊)する手法を開発することが可能と考えられる。今年度の主な成果は以下の通りである。1)ケージドsiRNAの合成動物細胞においては、21塩基のsiRNAを導入することでRNAiが観測される。導入されたsiRNAは細胞内で1本鎖に解離してからターゲットに結合すると考えられる。そこで、dsRNAの1本鎖への解離を光制御するために、Bhc基を光解離基として持つ光応答性dsRNA架橋試薬を設計・合成した。この試薬をsiRNAと混合したものをHeLa細胞に導入したところ、GFPに対するRNAi効果が顕著に弱まっていることを観測した。この結果は、合成した光応答性架橋試薬と反応したsiRNAは、RNAi誘導能を失っていること、すなわちケージド化合物になっていることを示唆している。現在、光照射によるRNAi誘導能の回復、リンカー構造の最適化を検討している。2)核酸塩基へのBhc基の導入法の確立様々なアンチセンスオリゴをケージド化合物へと変換するには、核酸塩基部位に光分解性保護基であるBhc基を導入しなければならない。高効率でBhc基を導入できる前駆体であるBhc-クロロホルメートを合成することに成功した。これを用いて合成したケージドアデニンは、従来のものに比べてより優れた光分解効率を示すことも明らかにした。

作为一种全面分析基因功能的新方法，我们旨在开发一种以时间和位点特异性方式抑制任何基因功能的方法。作为在综合分析中抑制基因功能的方法，使用双链RNA的RNAi方法和使用修饰的寡核苷酸的反义寡核苷酸方法是有希望的。通过将它们与笼化合物的化学结合在一起，人们认为可以开发在特定时间抑制特定细胞（组织）中任何基因功能的方法。今年的主要结果如下：1）动物细胞中的合成笼siRNA，通过引入21个siRNA碱基观察RNAi。人们认为，在与靶标结合之前，引入的siRNA将分解为单元中的单个链。因此，为了轻轻控制DSRNA的分离为单链，将光反应DSRNA交联试剂与BHC组作为光解异步组的设计和合成。当将该试剂与siRNA混合到HeLa细胞中时，观察到RNAi对GFP的影响显着削弱。该结果表明，siRNA与合成的光反式交联试剂反应失去了诱导RNAi的能力，即它已成为笼子化合物。目前，我们正在考虑通过辐照和优化接头结构来恢复诱导RNAi的能力。 2）建立一种将BHC组引入核碱酶的方法，以将各种反义寡寡寡做转化为笼子化合物，必须在核碱基位点引入可光降解的保护组BHC组。我们已经成功合成了BHC-氯仿，这是一种可以高效效率引入BHC基团的先驱。还揭示了使用该产品合成的笼腺嘌呤比常规的光降解效率更好。