遺伝子のコンディショナルな機能阻害の新手法

一种条件抑制基因功能的新方法

• 批准号: 14011247
• 负责人: 古田 寿昭
• 金额: $ 3.65万
• 依托单位: Toho University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
• 财政年份: 2002
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2002 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-14011247/
• 关键词: ケージド化合物; RNA干渉; 核酸; 遺伝子; 光化学的スイッチ

遺伝子の機能を網羅的に解析するための新手法として、任意の遺伝子の機能を時期および部位特異的に阻害する方法の開発を目指した。網羅的解析における遺伝子の機能阻害法としては、2本鎖RNAを用いるRNAi法と、修飾オリゴヌクレオチドによるアンチセンスオリゴヌクレオチド法が有望である。これらとケージド化合物の化学を組み合わせることで、特定の時期に特定の細胞(組織)で任意の遺伝子の機能を阻害(または破壊)する手法を開発することが可能と考えられる。今年度の主な成果は以下の通りである。1)ケージドsiRNAの合成動物細胞においては、21塩基のsiRNAを導入することでRNAiが観測される。導入されたsiRNAは細胞内で1本鎖に解離してからターゲットに結合すると考えられる。そこで、dsRNAの1本鎖への解離を光制御するために、Bhc基を光解離基として持つ光応答性dsRNA架橋試薬を設計・合成した。この試薬をsiRNAと混合したものをHeLa細胞に導入したところ、GFPに対するRNAi効果が顕著に弱まっていることを観測した。この結果は、合成した光応答性架橋試薬と反応したsiRNAは、RNAi誘導能を失っていること、すなわちケージド化合物になっていることを示唆している。現在、光照射によるRNAi誘導能の回復、リンカー構造の最適化を検討している。2)核酸塩基へのBhc基の導入法の確立様々なアンチセンスオリゴをケージド化合物へと変換するには、核酸塩基部位に光分解性保護基であるBhc基を導入しなければならない。高効率でBhc基を導入できる前駆体であるBhc-クロロホルメートを合成することに成功した。これを用いて合成したケージドアデニンは、従来のものに比べてより優れた光分解効率を示すことも明らかにした。

The purpose of this paper is to develop a new method for analyzing the function of gene, and to develop a method for preventing the function of gene at different times and in different parts. The functional blocking method for the analysis of the vector in the network is expected to be used in the RNAi method and the modification method. The chemical composition of these compounds can be used to inhibit the function of any gene at a specific time. This year's main achievements are as follows: 1) RNAi assay for the introduction of siRNA into synthetic animal cells. The siRNA introduced into the cell is dissociated from the gene and bound to the cell. Design and synthesis of photodissociation and photodissociation of dsRNA The siRNA was introduced into HeLa cells and GFP was detected. The results showed that the synthesis of photoresponsive bridging assays, siRNA and RNAi inducible activity was not successful, and that the synthesis of photoresponsive bridging assays was successful. Now, the recovery of RNAi induced by light irradiation and the optimization of RNAi structure are discussed. 2)A method for establishing a method for introducing a Bhc group into a nucleic acid moiety is disclosed. High Bhc-base synthesis This is the first time that I've ever seen a person who's been in a relationship with someone who's been in a relationship with someone else.

项目成果

Hirayama, Y., Iwamura, M., Furuta, T.: "Design, synthesis and photochemical properties of caged bile acids"Bioorg.Med.Chem.Lett.. 13. 905-908 (2003)

Hirayama, Y.、Iwamura, M.、Furuta, T.：“笼中胆汁酸的设计、合成和光化学性质”Bioorg.Med.Chem.Lett.. 13. 905-908 (2003)

Mizuta, H., et al.: "Design, synthesis, photochemical properties and cytotoxic activities of water-soluble caged leucyl-leucine methyl esters that control apoptosis of immune cells"Bioorg.Med.Chem.. 10. 675-683 (2002)

Mizuta, H., 等人：“控制免疫细胞凋亡的水溶性笼状亮氨酰-亮氨酸甲酯的设计、合成、光化学性质和细胞毒性活性”Bioorg.Med.Chem.. 10. 675-683 (2002