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生体分子のパスウェイ・ネットワークの光制御法の確立

生物分子通路网络光控方法的建立

基本信息

批准号：
17017036
负责人：
古田寿昭
金额：
$ 2.88万
依托单位：
Toho University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
2005
资助国家：
日本
起止时间：
2005 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

細胞現象を担う個々の分子の機能は明らかになりつつあるが,既存の研究手法の組み合わせだけでは,生命の全体像を捉えることは難しい。生命をシステムとして理解することを可能にする新しい方法論の開発が急務である。例えば,複数の分子が協同してはたらくネットワークを分解して,再構成して理解する学際的な研究手法が必要である。これを可能にする要素技術を確立するため,ケージド化合物の化学を活用して,時期および細胞(組織)特異的に細胞現象を制御する技術の開発を目指して研究を行った。ペプチド核酸(PNA)は,DNAの糖-リン酸骨格を(2-アミノエチル)グリシンに置換した核酸類似体である。PNAは,DNAやRNAとの相補鎖形成において高い親和性と特異性を持ち,アンチセンス試薬として適している。また,細胞核内に侵入してターゲットのdsDNAと結合し,転写を抑制することも報告されている。そこで,生きた細胞内で遺伝子発現を光制御することを目指し,PNAの核酸塩基部分に光分解性保護基を導入したcaged PNAを合成し,そのアンチセンス効果を光制御する可能性を検討した。まず,光分解性保護基であるBmcmoc基をシトシンに導入してケージドPNAモノマー(C^<Bmcmoc>)とし,16-merのcaged PNA(H_2N-TTCTCTTC^<Bmcmoc>CTTCTCT-Gly-COOH)を合成した。合成したcaged PNAとDNAとの親和性を,3本鎖形成に伴うゲルシフトとTm値の測定で評価した。その結果,1個のBmcmoc基の導入でTm値は10℃低下し,3本鎖形成も阻害されることがわかった。また,PNAによるPCR clampingもBmcmoc基の導入によって阻害され,caged PNAが存在してもテンプレートDNAの増幅はほとんど影響されなかった。

The cell seems to be able to carry out two molecular mechanisms, the existing research methods are organized, and the whole life cycle is like a catch-all. The life cycle is very important to understand that it is possible to discuss new methods and start urgent business talks. For example, complex molecules coordinate with each other to decompose them, and then to understand the necessary research methods. It is possible to make sure that the factor technology is in place, that the chemical compound is used actively, and that the special cell (organization) is designed to control the application of the technology to the research industry. Nucleic acid (PNA), DNA carbohydrate-like nucleic acid (Nucleic acid-like), nucleic acid-like DNA. PNA, DNA, RNA, and so on, so that they are highly sensitive and specific in nature. The invasion of the nucleus, the combination of DNA and DNA. The PNA nucleic acid base part of the photolysis protection gene is incorporated into the caged PNA synthesis, and the possibility of the photolysis is affected by the light system. Photodegradability protection base (Bmcmoc), lt;Bmcmoc> (C ^ & lt;Bmcmoc>), 16-mer (16-mer 2N-TTCTTC ^ & lt;Bmcmoc>CTTCTCT-Gly-COOH) synthetic materials. Synthesize the "caged PNA" DNA "and" sex ", and form the" companion "" Tm "to determine the quality of the product. The results showed that one Bmcmoc gene was involved in the low temperature of 10 ℃ in Tm, and three books formed a blocking agent. The PNA, PNA, PCR clamping, Bmcmoc base data enter the block block, and the caged PNA has a negative impact on the DNA image.