新しい機能性遺伝子同定技術の創出と成人病性血管障害関連遺伝子探索への応用

新型功能基因鉴定技术的创建及应用，寻找与成人疾病血管病相关的基因

• 批准号: 14013025
• 负责人: 米倉 秀人
• 金额: $ 3.39万
• 依托单位: Kanazawa University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
• 财政年份: 2002
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2002 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-14013025/
• 关键词: functional genomics; gene screening; antisense oligonucleotide; antisense display; angiogenesis; vascular endothelial cells; cDNA cloning; genome database screening

本研究の目的は、任意の表現形質を担う遺伝子を機能面から系統的かつ簡便に同定する技術として代表者らが独自に考案したAntisense Display法を新しい機能性遺伝子スクリーニング技術として確立し、成人病性血管障害関運遺伝子、特に血管新生抑制性遺伝子の分離に適用することである。平成14年度の研究で、以下の成果を得た。1.平成13年度に行なった血管新生関連遺伝子のスクリーニングで同定された、血管内皮細胞の増殖促進を示す10mer陽性アンチセンスプールの高次スクリーニングを以下のとおり行なった。陽性プールに含まれていた16種のアンチセンス配列を単独でスクリーニングし、単一の陽性配列を同定した。続いて当該配列の鎖長を12merに延長した16種のアンチセンス配列を調製してスクリーニングを行ない、単一の陽性配列を同定した。さらに当該配列の鎖長を14merに延長した16種のアンチセンス配列を調製してスクリーニングを行ない、血管内皮細胞の増殖促進を示す単一の14mer配列を同定した。2.同定したアンチセンス配列を基にRT-PCRクローニングを行ない、上記14mer配列を有するcDNAをヒト血管内皮細胞より分離し、その配列を決定した。3.決定した配列でヒトゲノムデータベースのサーチを行なったところ、当該配列はこれまで全く報告されていない新規の遺伝子で、11番染色体上に位置していることが明らかになった。4.後期糖化反応生成物(advanced glycation endproducts, AGE)による周皮細胞喪失(pericyte loss)に関係する遺伝子をスクリーニングするため、改良Antisense Display法のヒト血管周皮細胞への適用をスタートした。

The purpose of this study is to establish a new functional gene expression technique for the isolation of vascular disease-related genes, especially angiogenesis-inhibiting genes, based on an independent study of the Antisense Display method. Heisei 14 years of research, the following results were obtained. 1. In 2013, the growth of angiogenesis related genes and vascular endothelial cells was promoted by 10mer positive reaction. There are 16 kinds of positive pairs in the positive pairs, and the positive pairs are the same. When the lock length of the array is 12mer, the length of the array is 16. When the lock length of the array is 12mer, the length of the array is 16. When the lock length of the array is 12mer, the length of the array is 16. When the lock length of the array is 12 mer, the length of the array is 16. When the lock length of the array is 12. In addition, when the length of the alignment is extended by 14mer, 16 kinds of alignment are modulated, and the proliferation of vascular endothelial cells is promoted. 2. The sequence of cDNA was determined by RT-PCR. The sequence of cDNA was determined by PCR. 3. To determine the alignment of the chromosome, we need to report the position of the new chromosome on chromosome 11. 4. Advanced glycation endproducts (AGE) are associated with pericyte loss, and application of the modified Antisense Display method to pericyte loss is discussed.

项目成果

Sakurai, S. et al.: "Identification of a novel AGE-capturable soluble variant of the RAGE in human sera"Excerpta Medica International Congress Series. 1245. 163-167 (2002)

Sakurai, S. 等人：“人类血清中 RAGE 的新型 AGE 可捕获可溶性变体的鉴定”医学摘录国际大会系列。

Sakurai, S.et al.: "The AGE-RAGE system and diabetic nephropathy"J.Am.Soc.Nephrol.. (in press). (2003)

Sakurai, S.et al.：“AGE-RAGE 系统和糖尿病肾病”J.Am.Soc.Nephrol..（出版中）。

Yamamoto, Y.et al.: "The role of AGE-RAGE system in the development of diabetic nephropathy in vivo"Excerpta Medica International Congress Series. 1245. 45-50 (2002)

Yamamoto, Y.et al.：“AGE-RAGE 系统在体内糖尿病肾病发展中的作用”医学摘录国际大会系列。

Kim Y.M.et al.: "PNUTS, a protein phosphatase 1(PP1) nuclear targeting subunit : Characterization of its PP1-and RNA-binding domains and regulation by phosphorylation"J Biol Chem.. (in press). (2003)

Kim Y.M. 等人：“PNUTS，一种蛋白磷酸酶 1 (PP1) 核靶向亚基：其 PP1 和 RNA 结合域的表征以及磷酸化调节”J Biol Chem..（正在出版）。

Yonekura, H. et al.: "Novel splice variants of the receptor for advanced glycation endproducts (RAGE) expressed in human vascular endothelial cells and pericytes, and their putative roles in diabetes-induced vascular injury"Biochem. J.. 370(3). 1097-1109

Yonekura, H. 等人：“在人血管内皮细胞和周细胞中表达的晚期糖基化终产物受体 (RAGE) 的新型剪接变体，及其在糖尿病引起的血管损伤中的假定作用”Biochem。