新しい機能性遺伝子同定技術の創出と成人病性血管障害関連遺伝子探索への応用

新型功能基因鉴定技术的创建及应用，寻找与成人疾病血管病相关的基因

• 批准号: 12204050
• 负责人: 米倉 秀人
• 金额: --
• 依托单位: Kanazawa University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas (C)
• 财政年份: 2000
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2000 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-12204050/
• 关键词: functional genomics; antisense display; gene screen; angiogenesis; pericyte loss

本研究の目的は、任意の表現形質を担う遺伝子を機能面から系統的かつ簡便に同定する技術として代表者らが独自に考案したAntisense Display法を新しい機能性遺伝子スクリーニング技術として確立し、成人病性血管障害関連遺伝子、特に血管新生抑制性遺伝子と糖尿病で起こる血管周皮細胞喪失の原因となる遺伝子の分離に適用することである。平成12年度の研究は、当初計画どおりに遂行され、以下成果を得た。1.種々のホスホロチオエート型アンチセンス(AS)プールを調製してヒト微小血管内皮細胞の培養培地に添加し、細胞増殖変化を指標にスクリーニング条件の検討を行なった。この結果、16種の配列を含む鎖長10merのASプールが最も良好に作用したことから、以後このレパートリーをスクリーニングに用いることに決定した。2.1プールあたり16種のA3からなる計512のプールを各3μmolスケールで合成・精製し、スクリーニング用の新規アンチセンスレパートリーの調製を完了した。3.各ASプールをヒト微小血管内皮細胞の培養培地に添加し、内皮細胞の増殖促進を指標に血管新生抑制性遺伝子の一次スクリーニングを開始した。4.後期糖化反応生成物(advanced glycation endproducts,AGE)による周皮細胞喪失(pericyte loss)に関与する遺伝子のスクリーニングのためのアッセイ条件を決定した。高次スクリーニングの過程では、AS配列の鎖長を順次長くし標的配列分離の特異性を上げる等の改良を図る予定である。

The purpose of this study is to establish the relationship between vascular disease and angiogenic inhibitors in adults and the causes of perivascular cell loss in diabetes mellitus. The research of Heisei 12 was carried out according to the original plan, and the following results were obtained. 1. The growth of microvascular endothelial cells in culture medium was investigated by means of cell proliferation index. As a result, the 16 kinds of arrangement, including the lock length of 10mer, have the best effect. 2.1 The synthesis, purification and modulation of 16 kinds of A3, 512 kinds of A3, 516 kinds of A3, 512 kinds of A3, 516 kinds of A3 kinds of A3, 516 kinds of A3, 516 kinds of 3. The growth of microvascular endothelial cells in culture was enhanced by the addition of AS protein, and the growth of endothelial cells was enhanced by the addition of angiogenic inhibitory protein. 4. Advanced glycation end products (AGE) are the most important factors in the development of pericyte loss. The process of high-order separation is to improve the specificity of AS alignment, lock length of AS alignment and target alignment.

项目成果

Kusano, Y: "Participation of syndecan 2 in the induction of stress fiber formation in cooperation with integrin alfa 5 beta 1 : Structural characteristics of heparan sulphate chains with avidity to COOH-terminal heparin-binding domain of fibronectin"Exp.

Kusano, Y：“syndecan 2 与整合素 alfa 5 beta 1 合作诱导应力纤维形成：硫酸乙酰肝素链的结构特征，对纤连蛋白 COOH 末端肝素结合域具有亲和力”Exp。

Yamamoto,H.: "Mechanisms of vascular injury in diabetes-lessons from vascular cells in culture and transgenic animals."Biomedical Reviews. (in press). (2001)

Yamamoto,H.：“糖尿病血管损伤的机制——培养物和转基因动物中血管细胞的教训。”生物医学评论。

Abedin,Md.J.: "Molecular heterogeneity of the receptor for advanced glycation endproducts."J.Biochem.Mol.Biol.Biophys.. 4. 373-381 (2000)

Abedin，Md.J.：“晚期糖基化终产物受体的分子异质性。”J.Biochem.Mol.Biol.Biophys.. 4. 373-381 (2000)

Miyakawa,T.: "Exposure of C.elegans to extremely low frequency high magnetic fields induces stress responses."Bioelectromagnetics. (in press). (2001)

Miyakawa,T.：“线虫暴露于极低频高磁场会诱发应激反应。”生物电磁学。

Yamamoto,T.: "Kinetic characterization of the nitric oxide toxicity for PC12 cells : effect of half-life time of NO release."Eur.J.Pharmacol.. 397(1). 25-33 (2000)

Yamamoto,T.：“PC12 细胞一氧化氮毒性的动力学特征：NO 释放半衰期的影响。”Eur.J.Pharmacol.. 397(1)。