インスリン産生細胞活性化因子の精製とその性質

胰岛素生成细胞激活剂的纯化及其性质

• 批准号: 08680645
• 负责人: 米倉 秀人
• 金额: $ 1.41万
• 依托单位: Kanazawa University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
• 财政年份: 1996
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1996 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-08680645/
• 关键词: Pancreatic islet β-cells; DNA synthesis; Purification; Amino acid sequence

インスリンを産生する膵ランゲルハンス(ラ)島β細胞はきわめて再生・増殖能に乏しく、これが糖尿病発症の大きな要因の一つとされている。膵β細胞増殖を活性化する因子を明らかにできれば、これまでほとんど不明であった膵β細胞の増殖機構の解明および糖尿病患者自身の膵β細胞を再生・増殖させ治癒させるという新しい治療法開発が期待できる。本研究の目的は、申請者らが最近新しく見出したインスリン産生細胞活性化因子を精製するとともにその性質を明らかにすることである。平成8年度の研究は、以下のとおりに進行した。1.申請者らが膵β細胞増殖を刺激する因子を分泌することを見出した細菌の培養液より、(1)イオン交換クロマトグラフィー(Q Sepharose)、(2)ヒドロキシアッパタイトクロマトグラフィー、(3)疎水相互作用クロマトグラフィー(Phenyl Superose)、(4)ゲルろ過(Superdex 75)を用いて、膵ラ島DNAへの^3H-チミジン取込を指標に活性化因子を精製した。2.上記の最終精製標品(Superdex 75画分)をSDS-ポリアクリルアミドゲル電気泳動法で解析を行ったところ、分子量26,000の蛋白が検出された。3.Superdex 75画分を単離ランゲルハンス島の培養に添加してDNAへの^3H-チミジン取込を解析したところ、用量依存的に取込が増大し約1ng/mlの濃度で最大となった。4.Superdex 75画分をSDS-ポリアクリルアミドゲル電気泳動後PVDF膜に転写し、26kDa蛋白のアミノ酸配列を決定したところ、N-末端から11アミノ酸の配列が得られた。当該アミノ酸配列を用いてデータベース検索を行ったが、有意な相同性を有する蛋白は存在せず、本蛋白はこれまで報告されていない新規の蛋白と考えられた。

イ ン ス リ ン を produce す る Cui ラ ン ゲ ル ハ ン ス beta cells (ラ) island は き わ め て regeneration, rights can yield に spent し く, こ れ diabetic 発 が の big き な by の a つ と さ れ て い る. Cui beta cells raised colonization を activeness す る factor を Ming ら か に で き れ ば, こ れ ま で ほ と ん ど unknown で あ っ た Cui beta cells の raised colonization institutions の interpret お よ び diabetes itself の を Cui beta cells regeneration, raised colonization さ せ cure さ せ る と い う new し い therapy open 発 が expect で き る. は の purpose, this study applicants ら が recently new し く shows し た イ ン ス リ ン produce cell activation factor を refined す る と と も に そ の nature を Ming ら か に す る こ と で あ る. In the Heisei 8 fiscal year, the <s:1> research and the following とお とお に に are conducted for <s:1> た. 1. The applicant ら が Cui beta cells raised colonization を stimulus す る factor secretion を す る こ と を shows し よ の た bacteria broth り, (1) イ オ ン exchange ク ロ マ ト グ ラ フ ィ ー (Q) Sepharose), (2) ヒ ド ロ キ シ ア ッ パ タ イ ト ク ロ マ ト グ ラ フ ィ ー, (3) interaction 疎 water ク ロ マ ト グ ラ フ ィ ー (Phenyl Superose), (4) ゲ ル ろ too (Superdex 75) を い て, Cui ラ island DNA へ の ^ 3 h - チ ミ ジ ン take 込 を に activeness index factor を refined し た. 2. Written の finally refined standard product (Superdex 75 points) を SDS - ポ リ ア ク リ ル ア ミ ド ゲ ル 気 swimming method analytical line を っ で た と こ ろ, protein molecular weight 26000 の が 検 out さ れ た. 3. Superdex 75 painting を 単 from ラ ン ゲ ル ハ ン ス island の cultivate に add し て DNA へ の ^ 3 h - チ ミ ジ ン take 込 を parsing し た と こ ろ, dosage dependent に take 込 が raised large し about 1 ng/ml の concentration で biggest と な っ た. 4. Superdex 75 painting を SDS - ポ リ ア ク リ ル ア ミ ド ゲ ル electric 気 PVDF film after swimming に planning write し, 26 kda protein の ア ミ ノ acid with column を decided し た と こ ろ, N - terminal か ら 11 ア ミ ノ acid の match column が must ら れ た. When the ア ミ ノ acid matched with column を い て デ ー タ ベ ー ス 検 cable line を っ た が, intentionally な phase gay を す る protein は せ ず, this protein は こ れ ま で report さ れ て い な い new rules の protein と exam え ら れ た.

项目成果

那谷耕司 他: "マウスReg I遺伝子を過剰発現する膵β細胞の増殖能:トランスジェニックマウスを用いた解析" 糖尿病. 40(印刷中). (1997)

Koji Natani 等人：“过度表达小鼠 Reg I 基因的胰腺 β 细胞的增殖能力：使用转基因小鼠进行分析”糖尿病 40（出版中）。

Nata,K.,et al.: "Human gene encoding (ADP-ribosyl cyaclase/cyclic ADP-ribose hydrolase) : organization, nucleotide sequences and alternative splicing." Gene. (in press). (1997)

Nata,K.,et al.：“人类基因编码（ADP-核糖基环化酶/环状 ADP-核糖水解酶）：组织、核苷酸序列和选择性剪接。”

Narushima,Y.,et al.: "Structure,chromosomal localization,and expression of mouse genes encoding type III Reg RegIIIα,RegIIIβ,RegIIIγ." Gene. (in press). (1997)

Narushima, Y., et al.：“编码 III 型 Reg IIIα、RegIIIβ、RegIIIγ 的小鼠基因的结构、染色体定位和表达”（正在出版）。

Noguchi,N.,et al.: "Cyclic ADP-ribose binds to FK506-binding protein 12.6 to release Ca2+from islet microsome." Journal of Biological Chemistry. 272. 3133-3136 (1997)

Noguchi,N.,et al.：“环状 ADP-核糖与 FK506 结合蛋白 12.6 结合，从胰岛微粒体中释放 Ca2。”

Hayashi,Y.,et al.: "Induction of various blood-brain barrier properties in non-neural endothelial cells by close apposition to co-cultured astrocytes." Glia. 19. 13-26 (1996)

Hayashi,Y.,et al.：“通过与共培养的星形胶质细胞紧密结合，在非神经内皮细胞中诱导各种血脑屏障特性。”