新しい機能性遺伝子同定技術の創出と成人病性血管障害関連遺伝子探索への応用

新型功能基因鉴定技术的创建及应用，寻找与成人疾病血管病相关的基因

• 批准号: 15012221
• 负责人: 米倉 秀人
• 金额: $ 3.9万
• 依托单位: Kanazawa University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
• 财政年份: 2003
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2003 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-15012221/
• 关键词: functional genomics; antisense display; antisense oligonucleotide; angiogenesis; vascular endothelial cells; soluble VEGF receptor; pIClin; alternative splicing

本研究の目的は、任意の表現形質を担う遺伝子を機能面から系統的かつ簡便に同定する技術として代表者らが独自に考案したAntisense Display法を新しい機能性遺伝子スクリーニング技術として確立し、成人病性血管障害関連遺伝子、特に血管新生抑制性遺伝子の分離に適用することである。平成15年度の研究で、以下の成果を得た。1)平成13、14年度に行なった血管新生関連遺伝子のスクリーニングで同定された血管内皮細胞の増殖促進を示す14merアンチセンス(AS)配列を用いて、cDNA/ESTデータベースを検索し、パーフェクトマッチ配列を有する候補配列を5種同定した。2)ヒト血管内皮細胞での候補配列の発現をRT-PCR法とノーザン法で検討した結果、5種のうち1種、pICln遺伝子の発現が確認された。3)pICln mRNAの別領域に対するASの添加で、血管内皮細胞の増殖促進が再現され、さらに血管内皮細胞の管腔形成が促進された。4)AS処理細胞での各種血管新生関連遺伝子の発現を調べたところ、選択的スプライシングによって生じる2種の血管新生抑制性可溶型VEGF受容体(soluble Flt-1,soluble neuropilin-1)mRNAの発現が特異的に抑制されていることが示された。5)血管内皮細胞にcDNAを導入しpIClnを過剰発現させると、血管内皮細胞の増殖が有意に阻害された。さらに、pIClnを過剰発現細胞ではsoluble Flt-1,soluble neuropilin-1 mRNAの発現が特異的に増加していた。以上、今回同定されたpICln遺伝子は、選択的スプライシングを制御するというこれまで知られていなかった新しいタイプの血管新生抑制遺伝子である可能性が示唆された。

Purpose の this study は, arbitrary の performance character を bear traces of う 伝 children を function か ら system か つ simple に be す る technology と し て representatives ら が に test case alone し た Antisense Display method を new し い functional legacy 伝 son ス ク リ ー ニ ン グ technology と し て establish し, adult diseases, vascular handicap of masato even heritage 伝 son, に angiogenesis inhibiting heritage 伝 son の separation に applicable す る こ と で あ る. In the year Heisei 15, the <s:1> research で and the following <s:1> achievements を obtained た. 1) pp.47-53 line 13, 14 year に な っ た angiogenesis masato even heritage 伝 son の ス ク リ ー ニ ン グ で with fixed さ れ た endothelial cells promote を の raised colonization in す killing 14 ア ン チ セ ン ス (AS) matched with column を い て, cDNA/EST デ ー タ ベ ー ス を 検 し and パ ー フ ェ ク ト マ ッ チ match column を have す る alternate with column を five be し た . 2) ヒ ト endothelial cells で の alternate with column の 発 now を rt-pcr method と ノ ー ザ ン method で beg し 検 た results, five の う 1 ち, pICln heritage 伝 son の 発 が now confirmed さ れ た. 3) The <s:1> domain of pICln mRNA に promotes the で addition of するAS <s:1>, the proliferation of vascular endothelial cells <s:1> promotes the が reproduction され, and the が formation of the lumen of さらに vascular endothelial cells <s:1> promotes された. 4) AS 処 Richard cells で の traces of various angiogenesis masato even 伝 son の 発 now を adjustable べ た と こ ろ, sentaku ス プ ラ イ シ ン グ に よ っ て raw じ る two の angiogenesis inhibiting type soluble VEGF let body (soluble Flt 1, soluble neuropilin-1)mRNA shows が specific に inhibition されて が る とが とが とが された. 5) The にcDNAを of vascular endothelial cells is introduced into the <s:1> pIClnを, which leads to させると and <s:1> proliferation が of vascular endothelial cells, intentionally に hindering された. Youdaoplaceholder0, pIClnを over-release cells で で soluble Flt-1,soluble neuropilin-1 mRNA <s:1> release が specific に increase て て た た. Above, today back to the same さ れ た pICln posthumous son 伝 は, sentaku ス プ ラ イ シ ン グ を suppression す る と い う こ れ ま で know ら れ て い な か っ た new し い タ イ プ の angiogenesis inhibiting heritage 伝 son で あ が る possibility in stopping さ れ た.

项目成果

米倉秀人: "医学大辞典(伊藤正男、井村裕夫、高久史麿 編),分担執筆(,p.118,p.1786,p.1799,p.2285)"医学書院. 3062 (2003)

米仓英人：“医学词典（由伊藤正雄、井村宏夫和隆久文麻吕编辑），合著者（第 118 页、第 1786 页、第 1799 页、第 2285 页）” Igaku Shoin 3062 (2003)。

Li, H.et al.: "Possible participation of pICln in the regulation of angiogenesis through alternative splicing of VEGF receptor mRNAs"Endothelium. (In press). (2004)

Li, H.等人：“pICln 通过 VEGF 受体 mRNA 的选择性剪接可能参与血管生成的调节”内皮细胞。

李 慧 他: "生体諸システムの制御臓器としての血管内皮細胞;5.血管新生系制御"血管医学(Vascular Biology & Medicine)(メディカルレビュー社). 4巻(2号). 41-46 (2003)

李辉等：“血管内皮细胞作为各种生物系统的控制器官；5.血管生成系统的控制”《血管生物学与医学》（医学评论出版）第4卷（第2期）。 ）

Unoki H. et al.: "Up-regulation of cyr61 in vascular smooth muscle cells of spontaneously hypertensive rats."Laboratory Investigation. 83(7). 973-982 (2003)

Unoki H.等人：“自发性高血压大鼠血管平滑肌细胞中cyr61的上调。”实验室研究。

Watanabe, T. et al.: "Preparation and characterization of recombinant protein phosphatase."Methods in Enzymology. 366. 321-338 (2004)

Watanabe, T. 等人：“重组蛋白磷酸酶的制备和表征。”酶学方法。