新しい機能性遺伝子同定技術の創出と成人病性血管障害関連遺伝子探索への応用

新型功能基因鉴定技术的创建及应用，寻找与成人疾病血管病相关的基因

• 批准号: 13204033
• 负责人: 米倉 秀人
• 金额: $ 3.33万
• 依托单位: Kanazawa University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas (C)
• 财政年份: 2001
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2001 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-13204033/
• 关键词: functional genomics; antisense display; gene screen; angiogenesis; hypoxia

本研究の目的は、任意の表現形質を担う遺伝子を機能面から系統的かつ簡便に同定する技術として代表者らが独自に考案したAntisense Display法を新しい機能性遺伝子スクリーニング技術として確立し、成人病性血管障害関連遺伝子、特に血管新生抑制性遺伝子の分離に適用することである。平成13年度の研究で、以下の成果を得た。1.平成12年度までに確立した改良Antisense Display法をヒト微小血管内皮細胞に適用し、内皮細胞の増殖促進を指標に血管新生抑制性遺伝子のスクリーニングを行ない、1プールあたり16種のASからなる計512のプールすべてのスクリーニングを完了した。その結果、i)増殖を促進すると思われるプール、ii)低酸素による増殖誘導を阻害するプール、iii)増殖を阻害するプールがそれぞれ複数プール見い出された。上記陽性プールのうち、i)は血管新生抑制性遺伝子が、ii)は低酸素応答に関与する遺伝子が、iii)は複製等に関わる遺伝子が、プール中のAS配列により抑制されたと考えられる。2.再現性確認の後、上記3種のカテゴリーより、最も顕著な変化を与えたプールを、i)より二種、ii)より二種、iii)より一種をえらび、二次スクリーニングを進行中である。具体的には、それぞれのプールに含まれていた16種のアンチセンス配列を単独で調製して(5プール×16配列=80アンチセンス)、内皮細胞の増殖促進を指標にスクリーニングを行ない、上記の形質変化を引き起したユニーク配列を決定し、この配列をもとに対応する遺伝子を分離する。

Purpose の this study は, arbitrary の performance character を bear traces of う 伝 children を function か ら system か つ simple に be す る technology と し て representatives ら が に test case alone し た Antisense Display method を new し い functional legacy 伝 son ス ク リ ー ニ ン グ technology と し て establish し, adult diseases, vascular handicap of masato even heritage 伝 son, に angiogenesis inhibiting heritage 伝 son の separation に applicable す る こ と で あ る. In the 13th year of the Heisei era, the <s:1> research で and the following <s:1> achievements を obtained た. In Heisei 12, までに established た to improve Antisense Display method を ヒ ト し に apply small vascular endothelial cells, endothelial cells, promote を の raised colonization index に angiogenesis inhibiting heritage 伝 son の ス ク リ ー ニ ン グ を line な い, 1 プ ー ル あ た り 16 の AS か ら な る 512 の プ ー ル す べ て の ス ク リ ー ニ ン グ を finished し た. そ の results, I) raised colonization を promote す る と think わ れ る プ ー ル, ii) low acid に よ る rights induced を colonization resistance against す る プ ー を ル, iii) raised colonization resistance against す る プ ー ル が そ れ ぞ れ plural プ ー ル see い out さ れ た. Written positive プ ー ル の う ち, I) は angiogenesis inhibiting heritage 伝 が, ii) は low acid element 応 answer に masato and す る heritage 伝 が, iii) は copy such AS に masato わ る heritage 伝 が, プ ー ル の AS assortment of に よ り inhibit さ れ た と exam え ら れ る. 2. Confirm your の reproducibility, written three の カ テ ゴ リ ー よ り, most も 顕 the な variations change with え を た プ ー ル を, I) よ り two, ii) よ り two, iii) よ り a を え ら び, secondary ス ク リ ー ニ ン グ を underway で あ る. Specific に は, そ れ ぞ れ の プ ー ル に containing ま れ て い た 16 の ア ン チ セ ン ス match column を 単 alone で modulation し て (5 プ ー ル x 16 match column = 80 ア ン チ セ ン ス), endothelial cells, promote を の raised colonization index に ス ク リ ー ニ ン グ を line な い, written の character - the を lead き up し た ユ ニ ー ク column を decided し, こ の match column を も と に polices Youdaoplaceholder0 leaves 伝 offspring を to separate する.

项目成果

Kaneko T.: "Calpain-dependent proteolysis of merlin occurs by oxidative stress in meningiomas : a novel hypothesis of tumorigenesis"Cancer. 92(10). 2662-2672 (2001)

Kaneko T.：“脑膜瘤中氧化应激导致 merlin 的钙蛋白酶依赖性蛋白水解：肿瘤发生的新假说”癌症。

Sakurai, S.: "Identification of a novel AGE-capturable variant of the receptor for AGE in the human sera"Excerpta Medica International Congress Series. 1245(in press.). (2002)

Sakurai, S.：“人类血清中 AGE 受体的新型 AGE 可捕获变体的鉴定”医学摘录国际大会系列。

Yamamoto, Y.: "Development and prevention of advanced diabetic nephropathy in RAGE-overexpressing mice"J. Clin. Invest. 108(2). 261-268 (2001)

Yamamoto, Y.：“RAGE 过表达小鼠晚期糖尿病肾病的发生和预防”J.

Wu, P.: "Hypoxia down-regulates endostatin production by human microvascular endothelial cells an pericytes"Biochem. Biophys. Res. Commun. 288(5). 1149-1154 (2001)

Wu，P.：“缺氧下调人微血管内皮细胞和周细胞内皮抑素的产生”Biochem。

Harada, S.: "Effects of ELF high magnetic fields on enzyme-catalyzed DNA and RNA synthesis in vitro and on a cell-free DNA mismatch repair."Bioelectromagnetics. 22(4). 260-266 (2001)

Harada, S.：“ELF 高磁场对体外酶催化 DNA 和 RNA 合成以及无细胞 DNA 错配修复的影响。”生物电磁学。