体臓器由来の新規神経損傷修復因子による脊髄損傷部の改善・機能回復

利用源自身体器官的新型神经损伤修复因子改善脊髓损伤并恢复功能

• 批准号: 14017087
• 负责人: 堀江 秀典
• 金额: $ 4.48万
• 依托单位: Waseda University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
• 财政年份: 2002
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2002 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-14017087/
• 关键词: Oxidized Galectin-1; Nerve Regeneration; Macrophage; Tissue Culture; Neurotrophic Factor; Spinal cord

マウスのDRG並びにシュワン細胞を培養しガレクチンー1の分泌過程を免疫組織化学法並びに免疫電顕にて解析した。その結果ガレクチンー1が細胞膜に凝集した後細胞膜膜上に存在するようになり、最終的に細胞外液中存在することになることが証明された。次にシークエンス解明の進んでいるマウスを用いその腹腔のマクロファージを20億個集め、高圧窒素キャビテーション法を用いて細胞膜分画を分離し、酸化型ガレクチンー1のアフィニティーカラムに吸着する画分の分離精製を行っている。SDS-PAGEによる分離の結果数本のバンドが確認されその解析を行っている。酸化型ガレクチンー1刺激マクロファージの培養上清は軸索再生とシュワン細胞の遊走を促進する。その機構を細胞体から切り離された坐骨神経で検討した。細胞体から切り離された坐骨神経をコラーゲンゲル内で培養すると末梢側切断端からの軸索再生が見られたが、中枢側切断端からの再生は見られなかった。上記の培養上清を作用させると再生軸索数が増加しあらかじめ凍結損傷を加えて2週間後に摘出培養すると同様に促進され、併用すると相乗的に再生軸索数が増加した。この事実から神経系の可塑性の重要な機能の1つである発芽機構が神経線維内で調整されていることが明らかとなった。現在までDRGを伴った脊髄切片の脊髄側切断端並びに運動神経線維からの軸索再生が困難であったが、培養上清と凍結損傷を併用することにより再生が実現できるものと期待される。酸化型ガレクチンー1刺激マクロファージ培養上清中の軸索再生促進因子の分離精製の研究はマクロファージを大量培養し上清を10L集め更に精製を進めている。更に神経細胞の機能変化に関与しているとして注目されている遺伝子ΔfosBによって発現調節される蛋白質がGalectin-1であることをが判明し、Galectin-1が細胞の形態変化に関与していることが明らかになった。

The secretion of DRG cells was analyzed by immunohistochemistry and immunohistochemistry. The results showed that there was no change in the cell membrane after aggregation, and there was no change in the extracellular fluid after aggregation. The separation and purification of 2 billion samples by high pressure cell membrane fractionation were carried out using the method of separation and purification of acidified samples by adsorption. SDS-PAGE analysis was performed to confirm the number of samples separated. Acid-activated cells stimulate axonal regeneration in culture supernatant. The organ is cut off from the sciatic nerve. The ischial nerve from the severed cell bodies was cultured in a cylinder, and axonal regeneration was seen from the distal severed end, and regeneration from the central severed end. The number of regenerated axons in the culture supernatant increased after 2 weeks of culture, and the number of regenerated axons increased after 2 weeks of culture. The important function of plasticity of the nervous system is to adjust the internal dimension of the nervous system. The axonal regeneration of DRG is difficult due to the combination of spinal cord and motor cord. Study on Isolation and Purification of Axonal Regeneration Promoter in Supernatant of Acid-type Culture In addition, Galectin-1 was identified as a protein involved in the regulation of cellular function and morphological changes.

项目成果

Takano M. et al.: "Brain-derived neurotrophic factor enhances neurite regeneration from retinal ganglion cells in aged human retina in vitro"Exp Eye Res.. 74. 319-323 (2002)

Takano M.等人：“脑源性神经营养因子在体外增强老年人视网膜中视网膜神经节细胞的神经突再生”Exp Eye Res.. 74. 319-323 (2002)

Sango K. et al.: "Diabetes is not a potent inducer of neuronal cell death in mouse sensory ganglia, but it enhances neurite regeneration in vitro"Life Sci.. 71. 2351-2368 (2002)

Sango K. 等人：“糖尿病不是小鼠感觉神经节中神经元细胞死亡的有效诱导物，但它可以增强体外神经突再生”Life Sci.. 71. 2351-2368 (2002)

Saito H. et al.: "Trachea enhances neurite regeneration from adult rat nodose ganglia in vitro"Life Sci.. 70. 1935-1946 (2002)

Saito H. 等人：“气管在体外增强成年大鼠结状神经节的神经突再生”生命科学 70. 1935-1946 (2002)

Nishioka T, et al.: "fosB gene products trigger cell proliferation and morphlogical alteration with an increased expression of a novel processed form of galectin-1 in the rat 3Y1 embryo cell line"J. Biochem. (Tokyo). 131. 653-661 (2002)

Nishioka T 等人：“fosB 基因产物在大鼠 3Y1 胚胎细胞系中通过增加新型加工形式的 galectin-1 的表达来触发细胞增殖和形态改变”J.

Oshitani T. et al.: "Suppression of c-fos mediates inhibition or cell death and increases neurite regeneration in retinal ganglion cells"Invest Ophthalmol Vis Sci.. 43. 2442-2449 (2002)

Oshitani T. 等人：“c-fos 的抑制介导抑制或细胞死亡并增加视网膜神经节细胞中的神经突再生”Invest Ophasemol Vis Sci.. 43. 2442-2449 (2002)