ペルオキシソーム形成機構および先天性ペルオキシソーム欠損症病因の解明

阐明过氧化物酶体形成机制和先天性过氧化物酶体缺乏症的发病机制

• 批准号: 09780662
• 负责人: 塚本 利朗
• 金额: $ 1.28万
• 依托单位: Himeji Institute of Technology
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1997
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1997 至 1998
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-09780662/
• 关键词: ペルオキシソーム; 遺伝病

先天性ペルオキシソーム欠損症には症状の重篤度の異なる3つの病型が存在する。軽症型患者皮膚線維芽細胞を30℃で培養するとペルオキシソームが形成されることを見いだし、温度感受性(ts)の原因と考えられるPEX2のts変異(E55K)を同定した。ペルオキシソーム形成過程を解析するために、PEX2欠損CHO細胞(Z65)にts変異PEX2を導入したステーブルトランスフォーマントを単離し、ts性を示すクローンを単離した。CHO細胞由来のペルオキシソーム欠損変異株を用いた一過性発現系を利用したスクリーニングにより、ヒトPEX12、PEX1を単離し、患者の変異を同定した。ペルオキシソーム移行シグナルを付加した、GFP(Green Fluorescent Protein)の発現ベクターをペルオキシソーム欠損CHO変異細胞(Z65,ZP92,ZP102)で発現させたところ、これらのGFP融合タンパク質はいずれも核を含む細胞全体に分散した。これらの変異細胞を用いて、各相補遺伝子(PEX2,6,5)を導入した際のペルオキシソーム形成過程の検討を行った。生細胞の連続観察では、各変異細胞間で形成時間に多少の差は見られたが、基本的にマイクロインジェクションでの相補遺伝子導入後、数時間でペルオキシソームの形成が認められた。-方、固定細胞を用いた高解像度顕微鏡を用いた詳細な観察により、ZP92細胞には数個のCFP‐SKLの点状構造物が観察された。ペルオキシソーム膜タンパク質に対する抗体との2重染色により、ペルオキシソーム膜タンパク質を含むいわゆるゴ-ストとこの点状構造物とは近接しているが一致はしていないことがわかった。

Congenital polysomy is a condition in which the severity of symptoms varies from one type to another. The reason for the change of temperature sensitivity (ts) and PEX2 ts difference (E55K) in the formation of cell culture at 30℃ in the skin line of patients with acute leukemia. Analysis of the formation process of PEX2 in CHO cells (Z65) CHO cell origin, poor quality, transient development, utilization, PEX12, PEX1 isolation, and patient diversity In addition, GFP(Green Fluorescent Protein) was found in the defective CHO cells (Z65, ZP92, ZP102), and GFP fusion protein was found in the defective CHO cells (ZP92, ZP102). This paper discusses the formation process of different cell types and phase supplements (PEX2,6,5). The difference in the formation time between the different cells was observed after the introduction of the basic phase supplement, and the formation time of the different cells was observed. Square and fixed cells were examined in detail using high-resolution microscopes, and several CFP-SKL punctual structures were observed in ZP92 cells. 2-fold staining of antibodies against the membrane of a protein containing a protein that is closely related to the protein.

项目成果

Otera,H et al: "Peroxisome targeting signal type1 (PTS1) receptor is involved in import of both PTS1 and PTS2:Studies with PEX5-defective CHO cell mutarts" Mol Cell Biol. 18・1. 388-399 (1998)

Otera, H 等人：“过氧化物酶体靶向信号 1 型 (PTS1) 受体参与 PTS1 和 PTS2 的输入：PEX5 缺陷型 CHO 细胞突变体的研究”Mol Cell Biol 18・1 (1998)。

Shimozawa,N.et.al.: "A novel mutation, R125X in peroxisome, assembly factor-1 responsible for Zellweger syndrome" Hum Mutation. suppl1. S134-S136 (1998)

Shimozawa,N.et.al.：“一种新的突变，过氧化物酶体中的 R125X，组装因子 1 导致齐薇格综合征”Hum 突变。