生殖腺細胞の遺伝子発現に与えるダイオキシンの影響についての研究

二恶英对性腺细胞基因表达影响的研究

• 批准号: 14042270
• 负责人: 川尻 要
• 金额: $ 2.69万
• 依托单位: Research Institute for Clinical Oncology, Saitama Cancer Center
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
• 财政年份: 2002
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2002 至 2003
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-14042270/
• 关键词: TCDD; AhR; 細胞質・核間輸送; 細胞密度; ケラチノサイト; リン酸化; P38 MAPK; EGFR; 内分泌撹乱物質; SXR; CYP3A4; 核移行; PCN

1).分子内修飾と細胞密度によるAhRの細胞内局在の調節機構i)AhRはHaCaTの細胞密度により細胞内局在が変化し、低密度では主に核に高密度では細胞質に局在する。核外輸送阻害剤であるLeptomycin Bの添加実験より、密度依存的な分布の変化は高密度におけるAhRの核外輸送の促進によることが示唆された。(ii)細胞密度によりAhRの転写活性は変化し、その局在性に依拠することをXRE-luciferaseを組み込んだHaCaT細胞のレポーター活性で明らかにした。(iii)XRE-GFPを組み込ませたHaCaT細胞を用いてin vitro wound healing modelによる実験を行った結果、転写活性化が細胞間接着の希薄なwound edgesにそって見られることを明らかにした。(iv)AhRの核外輸送活性はNESのSer68をnegative chargeをもつAspに置換すると阻害される。この観察はSer68がリン酸化されるとAhRは核内に蓄積することを示唆する。(v)Phosphoserine68を含むペプチド抗体[Anti-AhR(61-74)-pS68]を作製し、活性化AhRが核内でリン酸化されることを明らかにした。(vi)p38MAPKの阻害剤SB203580でAhRの局在はより細胞質に移るが、ERK-MAPK系であるMEKの阻害剤U0126では変化が見られなかった。また、phosphatase阻害剤であるオカダ酸では逆に核への蓄積が促進された。従って、p38MAPKによるNES中のSer68のリン酸化と、細胞間接着シグナルで調節されるその脱リン酸化が細胞密度によるAhRの局在変化の分子機構として考えられる。2).生殖腺細胞でのAhR/ARNTの機能解析His-AhRを恒常的に発現している細胞は細胞増殖が遅く、またリガンドであるMC添加によりさらにその増殖速度が低下することが観察された。EGFR mRNAの発現量の変化は見られなかったが、EGFRタンパクのリガンド依存的な分解が観察された。この分解においてはProteasome阻害剤であるMG-132の添加効果は見られなかった。

1). Within the molecule modification と cell density に よ る AhR の cells inside bureau in の regulator I) AhR は HaCaT cell density の に よ り cells inside bureau in が - し, low density で は main に nuclear に high-density で は cytoplasm に bureau in す る. Outside the nuclear transport resistance against tonic で あ る Leptomycin の add B be 験 よ り, density dependent な distribution の variations change は high-density に お け る AhR の nucleus delivery の promote に よ る こ と が in stopping さ れ た. (ii) cell density に よ り AhR の は planning write activity - し, そ の bureau at sex に 拠 す る こ と を XRE - luciferase を group み 込 ん だ HaCaT cells の レ ポ ー タ ー active で Ming ら か に し た. (iii) XRE - GFP を group み 込 ま せ た HaCaT cells を using い て in vitro wound ranging model に よ る be 験 を line っ た results, planning to write activeness が cells indirect の and thin な wound edges に そ っ て see ら れ る こ と を Ming ら か に し た. (iv)AhR, exonuclear transport activity, <s:1> NES, <s:1> Ser68, をnegative charge, を に Asp, に displacement, すると resistance, される. <s:1> 観 observe がリ Ser68がリ <s:1> acidification されるとAhR に accumulation する とを とを とを indicate する. (v) Phosphoserine68 を containing む ペ プ チ ド antibody (Anti - AhR (61-74) - pS68] を as し, activeness AhR が intranuclear で リ ン acidification さ れ る こ と を Ming ら か に し た. (vi) p38MAPK の resistance against tonic SB203580 で AhR の bureau in は よ り cytoplasm に move る が, ERK MAPK system で あ る MEK の resistance against tonic U0126 で は variations change が see ら れ な か っ た. Youdaoplaceholder0, phosphatase inhibitor である また カダ カダ acid で <s:1> reverse に nuclear へ <s:1> accumulation が promote された. 従 っ て, p38MAPK に よ る in NES の Ser68 の リ ン acidification と, cells indirect シ グ ナ ル で adjust さ れ る そ の リ off ン acidification が cell density に よ る AhR の bureau in の molecular institutions - と し て exam え ら れ る. 2). The gonad cell で の AhR/ARNT の function analytical ihs - AhR を constant に 発 now し て い る cells は rights colonization が 遅 く, ま た リ ガ ン ド で あ る MC add に よ り さ ら に そ の raised colonization rate low が す る こ と が 観 examine さ れ た. EGFR mRNA の 発 amount is の variations change は see ら れ な か っ た が, EGFR タ ン パ ク の リ ガ ン ド dependent な decomposition が 観 examine さ れ た. The <s:1> <s:1> is decomposed by にお and て. The addition effect of <s:1> Proteasome inhibitor であるMG-132 is shown in られな and った.

项目成果

Kawajiri, K: "Regulation of nucleo-cytoplasmic transport of aryl hydrocarbon receptor."J.Health Science. 50(in press). (2004)

Kawajiri, K：“芳基烃受体核质转运的调节。”J.健康科学。

Ikuta, T.: "Phosphorylation of nuclear localization signal inhibits the ligand-dependent nuclear import of aryl hydrocarbon receptor."Biochem.Biophys.Res.Commun.. 315(in press). (2004)

Ikuta, T.：“核定位信号的磷酸化抑制芳基烃受体的配体依赖性核输入。”Biochem.Biophys.Res.Commun.. 315（印刷中）。

Kawana, K., Ikuta, T., Kawajiri, K.et al.: "Molecular mechanism of nuclear translocation of an orphan nuclear receptor, SXR"Mol.Pharmacol.. 63. 524-531 (2003)

Kawana, K.、Ikuta, T.、Kawajiri, K.等人：“孤儿核受体 SXR 核易位的分子机制”Mol.Pharmacol.. 63. 524-531 (2003)

Kawajiri, K., Ikuta, T., et al.: "Role of LXXLL-motif and AF2 domain in subcellular localizaiton of Dax-1"Mol. Endocrinol.. 17(in press). (2003)

Kawajiri, K.、Ikuta, T. 等人：“LXXLL 基序和 AF2 结构域在 Dax-1 亚细胞定位中的作用”Mol。

Ikuta, T.: "Cell density regulates intracellular localization of aryl hydrocarbon receptor."J.Biol.Chem.. 279(in press). (2004)

Ikuta, T.：“细胞密度调节芳烃受体的细胞内定位。”J.Biol.Chem.. 279（印刷中）。