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機能未知遺伝子の機能解析を指向した任意配列を認識する人工転写因子の構築

构建识别任意序列的人工转录因子，旨在对功能未知的基因进行功能分析

基本信息

批准号：
14011261
负责人：
鳥越秀峰
金额：
$ 3.58万
依托单位：
Tokyo University of Science
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
2002
资助国家：
日本
起止时间：
2002 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

現在、様々な生物のゲノム計画により、様々な生物の染色体の全塩基配列が明らかにされ、得られた塩基配列より遺伝子領域が同定されている。機能既知の遺伝子配列との相同性を基に、同定された遺伝子の機能を推測する場合が多いが、必ずしも該当する機能既知の相同遺伝子配列がなく、機能が未知のままの遺伝子は少なくない。この場合に、機能未知の遺伝子の発現を人工的に活性化・抑制し、その時の表現型を検討することにより、機能未知の遺伝子の機能を推測することが一つの有力な手段となる。しかし、天然に存在する転写因子はある特定の遺伝子上流配列のみを認識し、下流の遺伝子の発現を制御するため、任意の遺伝子上流配列を認識し、下流の任意の遺伝子の発現を活性化・抑制することは従来できなかった。本研究課題では、この点に鑑み、任意の遺伝子上流配列を認識し、下流の任意の遺伝子の発現を制御する人工転写因子を創製し、機能未知の任意の遺伝子の機能解析に利用できる系を構築することを目的として研究を行った。具体的には、機能未知遺伝子の上流配列と三重鎖核酸を形成しうる単鎖RNAに転写活性化or抑制ドメインをつなげ、この複合体を機能未知遺伝子の上流配列に結合させ、機能未知遺伝子の発現を制御することとした。しかし、単鎖RNAと蛋白質である転写活性化or抑制ドメインとをつなぐことは容易でないため、リンカーとしてRNA結合蛋白質とこの標的RNA配列との複合体を用いることとした。つまり、標的の遺伝子上流配列に結合する三重鎖核酸形成用の単鎖RNA(TFO)とRNA結合蛋白質の標的RNA配列(RS)との融合RNAと、RNA結合蛋白質(RBP)と転写因子の転写活性化or抑制ドメイン(ED)との融合蛋白質とが、RBP-RS相互作用を介して結合することにより、TFOとEDが一体化した新規の人工転写因子が構築される。この融合RNAおよび融合蛋白質発現用の各々のプラスミドを構築し、出芽酵母に導入した。出芽酵母アルコールデヒドロゲナーゼ遺伝子のプロモーター配列の下流にlac Z遺伝子を挿入したものをレポーター遺伝子として用い、構築した人工転写因子システムを評価した。

At present, in the field of biological engineering, the whole genome of biological chromosomes is clearly listed, and the sub-field is the same as that in the field. The machine can not only know that there are identical data sets, but also have the same set of data sets. If the same number of computers can be assigned to the same number of computers, it is necessary to know that the same number of people are assigned to the same number of computers, and that the same number of people can be assigned to the same number of computers. The artificial activation suppression is detected in the system, the machine energy is unknown, and the artificial activation suppression is detected. The machine is not known to be able to perform the activation suppression. There is a device in the upper stream of a specific device, a device in the upper stream, a controller in the upper stream, a controller in the upper stream, a driver in the upper stream, a driver in the upper stream, and a driver in the upper stream of the substratum in the middle of the weather. there is an active inhibition of activation in the upper stream of any child, and there is an active inhibition of activation. In this study, the problem, the location identification, the allocation of knowledge in the upper stream, the control of the artificial writing factors, the ability of the machine and the analysis of the computer can be used to analyze the purpose of the research. The configuration of the triple nucleic acid on the uplink of the specific cluster and the machine can form the triple nucleic acid of the cluster. The activation of the RNA write suppresses the activation of the or, and the combination of the upstream configuration of the unknown cluster and the unknown cluster can be realized. In this study, we used the RNA protein to write the active or inhibitor, the RNA binding protein, the RNA to bind the protein, the RNA to bind the protein and the complex to use the complex. The formation of triple nucleic acid using RNA (TFO) RNA binding protein RNA alignment (RS) fusion RNA, RNA binding protein (RBP) writing factor writing activating or inhibition protein (ED) fusion protein binding, RBP-RS interaction mediated fusion protein binding. TFO, ED, integration, new regulation, manual writing, writing factor, writing factor. The fusion protein was fused with RNA, and the yeast was introduced into the yeast. Saccharomyces cerevisiae was used to write the factor of lac Z, which was used as an artificial writing factor.